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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 菌P有结果，但测序显示为空载
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科技广场

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌P有结果，但测序显示为空载 已有3人参与

大家好，请教大家一个问题，构建的载体，为什么菌P有结果，但测序显示为空载？急求，谢谢，非常感谢
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1楼 2014-06-11 21:01:12
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-11 23:33:18
菌体PCR的假阳性是常有的，PCR非常灵敏，板子上有目的DNA，所以会有假阳性。

最好还是酶切鉴定正确后再送测序。
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2楼2014-06-11 21:44:28
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的目的片段多大啊？空载体转一圈也有可能的，遇到过，但一定有空载体的特征带，上图看看

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3楼2014-06-11 22:19:09
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-11 23:34:07
菌液PCR时选择好的体系，条件，做出来的结果还是很靠谱的，假阳性结果大多数都是自身的疏忽

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4楼2014-06-11 22:20:20
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-06-11 21:44:28
菌体PCR的假阳性是常有的，PCR非常灵敏，板子上有目的DNA，所以会有假阳性。

最好还是酶切鉴定正确后再送测序。

你想想，几个样你还可以搞搞，成本也还说得过去，几十个几百个你试试，你老板液未必受得了你的账单吧，貌似不是一个好主意哦

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5楼2014-06-11 22:22:57
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-11 23:34:59
1.你做过阳性对照确认你的菌落PCR的带大小一致？
2.你的PCR试剂中有没有污染？
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大家相互帮助哈
6楼2014-06-11 23:06:28
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