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铜虫 (小有名气)

[求助] 菌P有结果,但测序显示为空载 已有3人参与

大家好,请教大家一个问题,构建的载体,为什么菌P有结果,但测序显示为空载?急求,谢谢,非常感谢
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-06-11 23:33:18
菌体PCR的假阳性是常有的,PCR非常灵敏,板子上有目的DNA,所以会有假阳性。

最好还是酶切鉴定正确后再送测序。
2楼2014-06-11 21:44:28
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的目的片段多大啊?空载体转一圈也有可能的,遇到过,但一定有空载体的特征带,上图看看

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-06-11 22:19:09
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-06-11 23:34:07
菌液PCR时选择好的体系,条件,做出来的结果还是很靠谱的,假阳性结果大多数都是自身的疏忽

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-11 22:20:20
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-06-11 21:44:28
菌体PCR的假阳性是常有的,PCR非常灵敏,板子上有目的DNA,所以会有假阳性。

最好还是酶切鉴定正确后再送测序。

你想想,几个样你还可以搞搞,成本也还说得过去,几十个几百个你试试,你老板液未必受得了你的账单吧,貌似不是一个好主意哦

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-06-11 22:22:57
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-06-11 23:34:59
1.你做过阳性对照确认你的菌落PCR的带大小一致?
2.你的PCR试剂中有没有污染?
大家相互帮助哈
6楼2014-06-11 23:06:28
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