| 查看: 1524 | 回复: 5 | ||||
[求助]
有关限制性内切酶的用法 已有2人参与
|
| 我构建了T载体和目的基因的重组质粒，现在要进行双酶切获取目的基因，可是上下游用的酶速度不用，说明书上说一个只需要37度5min，另一个要37度16小时，而且两种酶的buffer也不一样，我要怎么建立酶切体系啊，两个酶和buffer是要一起加进去还是一个反应完在把另一个加进去 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 使用Primer Primer 5设计含有内切酶和保护序列的引物
已经有5人回复
- 生物学小知识、限制性内切酶基础知识整理
已经有70人回复
- 哪个公司有限制性内切酶BspHI(PagI)卖？
已经有7人回复
- 限制性内切酶图谱的确定
已经有7人回复
- 真菌转化技术--PCR获取线性化片段和限制性内切酶获取线性化片段的区别?
已经有9人回复
- 限制性内切酶放4°C，8个小时还能用吗？
已经有5人回复
- 限制性内切酶哪个牌子的好？
已经有13人回复
- 关于限制性内切酶的失活
已经有9人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 【求助/交流】限制性内切酶保护碱基
已经有20人回复
- 【求助/交流】关于限制性内切酶的用量
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于限制性内切酶的疑问？
已经有5人回复
- 【求助/交流】重金悬赏Ribosomal Database Project（RDP）这个数据库的用法，奖50金币
已经有4人回复
- 有关PPT的用法技巧1
已经有5人回复
- 【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活？？
已经有10人回复
gaojuan1985
新虫 (正式写手)
- 应助: 57 (初中生)
- 金币: 75.5
- 散金: 839
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 119.6小时
- 虫号: 1374933
- 注册: 2011-08-21
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2014-06-10 16:36:31
3楼2014-06-10 16:50:10
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8080.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:47:45
感谢参与，应助指数 +1
蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:47:45
|
反应时间倒是不会影响太多 buffer的话，这个第一次听说不共用，一般用Takara的酶，有张表，总是可以配上的。如果实在配不上，你用green buffer，这个是个万能buffer 其实，你不妨试一下用其中一个buffer，毕竟酶切没那么多严格限制，选择buffer时，选用两种酶相对来说活性都很高的那一种就可以了，只不过是效率问题，效率低的话，多切会儿 另外，分步切也可以，不过效率没想象的高 另外，额外说一下，NEB的在线分析软件Double Digest Finder 不错。你想进行任意两种酶的双酶切都可以通过这个软件查询能不能做，做得时候用什么Buffer。 |
4楼2014-06-10 17:45:09
5楼2014-06-10 19:34:56
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8080.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
6楼2014-06-10 19:41:00
10