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有关限制性内切酶的用法 已有2人参与
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| 我构建了T载体和目的基因的重组质粒，现在要进行双酶切获取目的基因，可是上下游用的酶速度不用，说明书上说一个只需要37度5min，另一个要37度16小时，而且两种酶的buffer也不一样，我要怎么建立酶切体系啊，两个酶和buffer是要一起加进去还是一个反应完在把另一个加进去 |
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gaojuan1985
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youlinglyw
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【答案】应助回帖
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蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:47:45
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蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:47:45
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反应时间倒是不会影响太多 buffer的话，这个第一次听说不共用，一般用Takara的酶，有张表，总是可以配上的。如果实在配不上，你用green buffer，这个是个万能buffer 其实，你不妨试一下用其中一个buffer，毕竟酶切没那么多严格限制，选择buffer时，选用两种酶相对来说活性都很高的那一种就可以了，只不过是效率问题，效率低的话，多切会儿 另外，分步切也可以，不过效率没想象的高 另外，额外说一下，NEB的在线分析软件Double Digest Finder 不错。你想进行任意两种酶的双酶切都可以通过这个软件查询能不能做，做得时候用什么Buffer。 |
4楼2014-06-10 17:45:09
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youlinglyw
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6楼2014-06-10 19:41:00
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