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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pMD18-T载体插入了外源DNA片段为何还能用蓝白斑筛选？
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free一毛钱

铜虫 (小有名气)

[求助] pMD18-T载体插入了外源DNA片段为何还能用蓝白斑筛选？ 已有3人参与

克隆位点在LacZ内部，插入了外源DNA片断后会破坏LacZ 基因，按说应该无法使用蓝白斑筛选啊？
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自强不息
1楼 2014-06-08 19:37:14
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-27 13:51:58
我一般不做的，没必要

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2楼2014-06-08 19:56:10
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-09 11:20:01
可以做的。片段插入进入的不显蓝色，如果是载体自连的话，在IPTG的诱导下，就会显蓝斑
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3楼2014-06-08 20:31:08
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zhaiaguan

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
free一毛钱(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-27 13:52:06
PUC系列的载体具有lacZ的α片段，而感受态细菌如DH5α能表达与α片段互补的w片段，当这两个z基因的突变产物在一起时可产生蛋白质间的α互补。当插入外源基因的PUC质粒导入感受态细胞DH5α，不具有β-半乳糖苷酶活性，不能将X-Gal底物水解产生蓝色物质，菌落呈白色，反之成蓝色。
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4楼2014-06-26 17:49:51
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