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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 怎么区分差别在一个bp的两条核酸的大小？
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forlovefang

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么区分差别在一个bp的两条核酸的大小？ 已有1人参与

我在公司合成了一段单链DNA,31bp，在5'端做了个腺苷化修饰，变成32bp,我想判断是否修饰上了，有什么方法可以辨别？请大家帮忙想想办法，谢谢
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1楼 2014-06-07 21:14:04
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-08 02:56:24
PAGE电泳，能区分1bp差异。
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2楼2014-06-07 21:23:06
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forlovefang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-06-07 21:23:06
PAGE电泳，能区分1bp差异。

跑了，我跑了15%变性胶和8%的非变性胶，都无法清楚分开
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3楼2014-06-07 21:26:11
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by forlovefang at 2014-06-07 21:26:11
跑了，我跑了15%变性胶和8%的非变性胶，都无法清楚分开...

取至少300ngDNA片段，配制20微升PCR体系（2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq酶），在72度反应10~20min, 后直接回收纯化加A尾的DNA片段可用于TA克隆，测序即可。
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4楼2014-06-07 22:17:18
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-08 02:57:06
联系公司吧，公司可以给你提供技术支持
我之前的引物怀疑降解了，于是公司把我的引物带回去，然后跑了个电泳
1bp都分辨得出。
赞一下(1人) 回复此楼
天行健
5楼2014-06-07 23:33:00
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