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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 求抗体浓度测定方法
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)

[求助] 求抗体浓度测定方法 已有5人参与

测抗体浓度，用了三种方法，差别好大，第一种是在抗体用pbs 透析后用BSA 做标曲测，第二种是抗体冻干成干粉后取一定量溶解后用BSA 做标曲测和，最后是抗体冻干成干粉后取一定量溶解后用紫外分光光度计测，本想看一下这三种方法测得结果是否一样，结果差距都太大，求各位大神指点啊！
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1楼 2014-06-06 09:46:48
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匿名

用户注销 (著名写手)
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10楼2014-06-07 15:47:13
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

现在抗体浓度有非常成熟的方法，如分光光度计法。
抗体质量消光系数是1.43，用A280直接除，就得到抗体的质量浓度了。
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13楼2014-06-09 12:54:42
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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千寻@德院: 金币+2 2014-06-06 12:25:06
我测抗体浓度用的第一种。你做的什么实验需要准确测定抗体浓度？我们只需知道大概的浓度，后面都以稀释倍数来表示抗体的工作浓度。
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2楼2014-06-06 10:56:03
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匿名

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★ ★
感谢参与，应助指数 +1
千寻@德院: 金币+2 2014-06-06 12:25:14
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3楼2014-06-06 11:02:22
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-06 10:56:03
我测抗体浓度用的第一种。你做的什么实验需要准确测定抗体浓度？我们只需知道大概的浓度，后面都以稀释倍数来表示抗体的工作浓度。

我是要稀释抗体做elisa，用来检测某种物质的成分，可是我冻干前后测得浓度差距一半，所以有点愁人
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4楼2014-06-06 12:24:06
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-06-06 11:02:22
一直是测a280计算的，但是不同抗体的摩尔消光系数不同，可自己计算一下，这样算出的浓度可能会更准确些

还要算摩尔消光系数，你们计算浓度的公式是啥啊
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5楼2014-06-06 12:24:59
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-06-06 12:24:06
我是要稀释抗体做elisa，用来检测某种物质的成分，可是我冻干前后测得浓度差距一半，所以有点愁人...

既然是稀释抗体做elisa，就没必要过于纠结抗体的具体浓度。抗体溶解后做梯度稀释，看看哪个稀释度最好，用于后续实验就行了。我以前冻干过抗原，发现冻干后没有那么好溶解了，为了方便，后来就不冻干了，小量分装保存到-70度。
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6楼2014-06-06 13:51:49
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-06 13:51:49
既然是稀释抗体做elisa，就没必要过于纠结抗体的具体浓度。抗体溶解后做梯度稀释，看看哪个稀释度最好，用于后续实验就行了。我以前冻干过抗原，发现冻干后没有那么好溶解了，为了方便，后来就不冻干了，小量分装保 ...

可是做竞争elisa,要做标曲，比如说要0.1ug/ml的抗体，就得知道抗体的浓度。
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7楼2014-06-06 14:40:02
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-06-06 14:40:02
可是做竞争elisa,要做标曲，比如说要0.1ug/ml的抗体，就得知道抗体的浓度。...

我做过竞争elisa检测小分子，没有说必须要0.1ug/ml的抗体，而是选取一个合适的抗体稀释度，使不加竞争物时的吸光值在1.0左右。
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8楼2014-06-06 15:14:25
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意楼上所说，没有必要一定用那个浓度做ELISA,只要不漏检不错检就可以了。给你个修订公式:
蛋白浓度mg/ml=1.55A280-0.74A260
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
9楼2014-06-07 15:22:15
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