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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 求抗体浓度测定方法
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 159236478 at 2014-06-07 15:22:15
同意楼上所说，没有必要一定用那个浓度做ELISA,只要不漏检不错检就可以了。给你个修订公式:
蛋白浓度mg/ml=1.55A280-0.74A260

谢谢，看来这个公式还多种多样呢，有人告诉我是1.53*A280/1.4
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11楼2014-06-09 12:05:03
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-06-07 15:47:13
可用：E=((5500×Nw) + (1490×NY) + (125×NC))/W

公式1 蛋白质消光系数计算公式 E：消光系数，单位(mg/ml)-1cm-1；W：蛋白质分子量，单位g/mol N：蛋白质序列中某种氨基酸个数；w：色氨酸；Y：酪氨酸；C：胱氨 ...

额，我不知道我的抗体的这些数据。。。。。非常感谢
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12楼2014-06-09 12:05:59
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

现在抗体浓度有非常成熟的方法，如分光光度计法。
抗体质量消光系数是1.43，用A280直接除，就得到抗体的质量浓度了。
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13楼2014-06-09 12:54:42
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laohuwang14

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

除你上述三种方法外，还有是用ELISA方法测定。用ELISA方法通常是测定Fc的浓度，再换算成抗体浓度。在这，抗Fc的抗体必须要选正确。 如你的抗体是人源抗体，必须用抗人Fc抗体，包括包被（若用夹心法）和检测抗体。
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14楼2014-06-09 12:58:11
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匿名

用户注销 (著名写手)
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15楼2014-06-09 15:48:29
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niyinluo

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-06 13:51:49
既然是稀释抗体做elisa，就没必要过于纠结抗体的具体浓度。抗体溶解后做梯度稀释，看看哪个稀释度最好，用于后续实验就行了。我以前冻干过抗原，发现冻干后没有那么好溶解了，为了方便，后来就不冻干了，小量分装保 ...

就是梯度稀释不太懂啊~~~不知道大概稀释多少呢？你一般都稀释多少的啊？1000+？
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16楼2015-03-21 13:13:04
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by niyinluo at 2015-03-21 13:13:04
就是梯度稀释不太懂啊~~~不知道大概稀释多少呢？你一般都稀释多少的啊？1000+？...

不同的抗体用的稀释度不同，我以前制的单抗稀释1000倍用，浓度约是1ug/mL。具体用量根据抗体的效价，低的话可以从100倍开始，2倍的梯度，8个梯度就到了12800。看看哪个稀释度的吸光值在1.0。

[ 发自小木虫客户端 ]
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17楼2015-03-21 17:43:15
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send！

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-06-06 11:02:22
一直是测a280计算的，但是不同抗体的摩尔消光系数不同，可自己计算一下，这样算出的浓度可能会更准确些

公式是什么，有相关文献吗？
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18楼2017-08-08 19:12:09
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send！

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 一步一步 at 2014-06-09 12:54:42
现在抗体浓度有非常成熟的方法，如分光光度计法。
抗体质量消光系数是1.43，用A280直接除，就得到抗体的质量浓度了。

能具体说说这个方法吗，或者有相关的文献吗？
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19楼2017-08-08 21:00:51
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