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蓝默儿金虫 (小有名气)
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[求助]
两种单抗夹心ELISA方法的建立
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| 用一株单抗进行包被，用另一株酶标单抗进行检测，抗原为纯化好的原核表达蛋白，同时设阴性对照和空白对照，结果阴性对照和空白值很高可达到1.5。为什么会出现这种情况，难道酶标单抗与另一株单抗反应了，好郁闷，求帮助。。。 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+4 2014-06-05 09:10:11
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+4 2014-06-05 09:10:11
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阴性对照和空白值都很高，请问你的空白值是怎么设置的？只加显色液？还是第一步没加阴阳性对照，第二步加了酶标抗体？ 可能的原因有： 1、你说的，酶标抗体和包被抗体有反应； 2、包被抗体后，没有进行封闭，导致酶标抗体吸附在微孔板上； 3、包被抗体后，进行封闭，封闭液的某些组分可以跟酶标抗体反应； 4、加入酶标抗体反应后，清洗不干净，导致酶标抗体残留在微孔板上。 最后，还是具体介绍一下你的实验步骤，实验条件，这样大家才好给你分析是哪里出问题了！ |
2楼2014-06-04 23:57:53
蓝默儿
金虫 (小有名气)
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- 专业: 兽医传染病学
送红花一朵 |
真心谢谢您的帮助，我的具体步骤是： 1.包被：将三种单抗混合，1：1000，1:2000,1:4000......1:128000稀释，做三个平行，4°过夜。 2.第二天洗涤4次，每次3min，拍干。5%脱脂乳封闭，37°，2h。 3.洗涤4次，每次3min，拍干。加抗原（为纯化好的原核表达蛋白）稀释浓度为2微克/ml，同时设阴性对照（胎牛血清1：100稀释），空白对照（PBS溶液)。37°，1h。 4.洗涤4次，每次3min，拍干。加酶标抗体（1:1000稀释），37°，1h。 5.洗涤4次，每次3min，拍干。加TMB显色，每孔100微升。37°，10min。 6.2M硫酸终止， 7.OD450读数。 |
3楼2014-06-05 09:09:47
4楼2014-06-05 09:58:50
