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hailey银虫 (小有名气)
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[求助]
2.3kb 大片段pcr 求赐教 已有4人参与
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请路过的虫友大神们看看，我的片段是2.3kb的，GC 含量是59.61% ，所以就没用GC buffer 。 所用PCR体系25ul , 10*transtart buffer 2.5ul transtart Taq ase 0.5ul dNTPs 1ul primer1 1ul primer 1ul cDNA 2ul dd 水 17ul 95度 5min 94度 30s 51度 -61度 设置梯度 各30s 72度 2.5min 72度 10min 35个循环 没有P出来目的条带，什么都没有，本想上传图片的，网络不好没有上传成功 求赐教 |
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不好意思，我看错了，但愿你没按我说的90s做，要不我就罪过大了。应该是30s,我之前用taq酶pcr时，(ddw32ul;5xHF buffer 10ul;dntp 2ul;primer mix 2ul;模版5ul) 98度，2min; 98度30s; 退火温度55度，30s; 72度，1min; 72度，5min. 18个循环 也用过Q5，体系50ul,(ddw35ul;q5反应液10ul;dntp1ul;primer mix2ul;模版1.5ul;q5酶0.5ul); 预变性98度30s； 变形98度15s; 复性55度20s； 延伸72度150s; 再延伸72度5min. 20个循环 |
19楼2014-06-06 17:37:43
2楼2014-06-02 07:34:15
hailey
银虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
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- 散金: 20
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- 注册: 2011-01-19
- 性别: MM
- 专业: 细胞衰老
3楼2014-06-02 09:12:30
4楼2014-06-02 09:19:40