应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接不上
51/1返回列表
查看: 1903  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yumupeipei

铜虫 (小有名气)

[求助] 连接不上 已有7人参与

我做双酶切后，再连接，就是连接不上，也找不到原因，重复了很多次，每次连接过夜后，跑电泳，有时出现三条带——双酶切的DNA和质粒，还有一条带，像是质粒的连接产物（PS：大小为质粒的两倍），有时就只有双酶切的DNA和质粒，但就是没有目的条带，请问各位，这是怎么回事儿，希望大家能帮我解答，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-05-27 08:19:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

万丽丽081222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:18:06
双酶切后的两个片段要跑胶纯化后再连接效率会高些。另外，跑胶验证连接是否连接成功不合理吧。如果你的质粒上有LacZ基因的话，可以用蓝白斑筛选的方法进行验证。
赞一下 回复此楼
learnenglish
3楼2014-05-27 10:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:17:57
连接之后最好直接转化感受态，然后涂一个对应的抗性平板，看看能不能长出克隆来。
赞一下 回复此楼
满堂花醉三千客，更无一人是知音。
2楼2014-05-27 09:46:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:18:14
新手做实验，遇到失败或阴性结果，最忌不停重复。
实验结果阴性，就多做些阳性对照。阳性对照阳性，说明你的操作（或者说实验体系没有问题）。阳性对照阴性，那就说明，你的操作（或者实验体系有问题），想办法解决）。
克隆的过程很多，假设有一步酶失活了，你怎么改善你的流程，都是无效的。如果你的阳性对照充足，就能找到哪一步出了问题。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-05-27 11:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:18:21
先把质粒分别用这两个酶切以后电泳，验证酶切位点是否正确
另外，你的目的片段是PCR产物直接双酶切还是从另外一个载体上酶切下来的呢？如果是PCR产物，建议先克隆到载体上，再进行酶切，当然，PCR产物，无论何时都要测序，确保序列正确。
连接以后没必要跑电泳，直接转化就行了，长菌鉴定。
没有阳性的话再找原因。
可以给载体片段脱磷，防止双酶切不完全，载体自连。
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-27 13:25:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26超级电容器申博 +3 dhdjdjend 2026-02-25 3/150 2026-03-02 19:21 by 轻松不少随
[考研] 283求调剂 +5 鹿沫笙 2026-03-02 5/250 2026-03-02 19:19 by zhukairuo
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+6 vida_a 2026-03-01 16/800 2026-03-02 19:13 by zhukairuo
[考研] 289求调剂 +8 yang婷 2026-03-02 9/450 2026-03-02 19:08 by zhukairuo
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 15/750 2026-03-02 18:47 by caszguilin
[考研] 中国科学技术大学材料与化工281求调剂，有科研和获奖经历 +4 wsxw 2026-03-02 4/200 2026-03-02 18:43 by caszguilin
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:07 by 2103240126
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +6 pin8023 2026-02-28 8/400 2026-03-02 17:13 by 0854蹲调剂
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 292求调剂 +7 yhk_819 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:43 by 无际的草原
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 材料学调剂 +10 提神豆沙包 2026-02-28 12/600 2026-03-02 09:26 by 李老师！
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭