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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

[求助] 连接不上已有7人参与

我做双酶切后,再连接,就是连接不上,也找不到原因,重复了很多次,每次连接过夜后,跑电泳,有时出现三条带——双酶切的DNA和质粒,还有一条带,像是质粒的连接产物(PS:大小为质粒的两倍),有时就只有双酶切的DNA和质粒,但就是没有目的条带,请问各位,这是怎么回事儿,希望大家能帮我解答,谢谢
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小月亮1990 at 2014-05-27 13:29:46
酶切之后要跑电泳,回收目的片段,回收后的片段,还要取出部分仔电泳,确定你能回收到目的片段,并做定量,再连接,一般片段和载体的摩尔比例:3:1~10:1,但是据我的多次连接经验,比例大一点连接效率会更好!希望 ...

嗯,我酶切之后切胶纯化,再连接,但是仍然连接不上,郁闷
7楼2014-05-27 15:16:22
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiangyu9356 at 2014-05-27 09:46:14
连接之后最好直接转化感受态,然后涂一个对应的抗性平板,看看能不能长出克隆来。

恩,我这样做过,但是送测序的时,结果失败,原因:信号太差
8楼2014-05-27 15:17:33
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