24小时热门版块排行榜    

查看: 1805  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yumupeipei

铜虫 (小有名气)

[求助] 连接不上已有7人参与

我做双酶切后,再连接,就是连接不上,也找不到原因,重复了很多次,每次连接过夜后,跑电泳,有时出现三条带——双酶切的DNA和质粒,还有一条带,像是质粒的连接产物(PS:大小为质粒的两倍),有时就只有双酶切的DNA和质粒,但就是没有目的条带,请问各位,这是怎么回事儿,希望大家能帮我解答,谢谢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-05-27 14:18:21
先把质粒分别用这两个酶切以后电泳,验证酶切位点是否正确
另外,你的目的片段是PCR产物直接双酶切还是从另外一个载体上酶切下来的呢?如果是PCR产物,建议先克隆到载体上,再进行酶切,当然,PCR产物,无论何时都要测序,确保序列正确。
连接以后没必要跑电泳,直接转化就行了,长菌鉴定。
没有阳性的话再找原因。
可以给载体片段脱磷,防止双酶切不完全,载体自连。
5楼2014-05-27 13:25:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yumupeipei 的主题更新
信息提示
请填处理意见