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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xzgood8888

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 求教大肠与酵母表达后的杂质问题~ 已有1人参与

如题,为什么同样表达一种蛋白,但使用了不同表达系统——大肠杆菌和毕赤酵母,后续的纯化工艺中一个使用了阴离子交换一个用的是阳离子交换?而且都是Binding-elute模式?是两种表达体系产生的杂质不同吗?这些杂质各有什么特点呢?请各位大侠解答~~
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自己好好的!
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xzgood8888

实习版主

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引用回帖:
3楼: Originally posted by happyhwb at 2014-05-20 18:16:53
可能是酵母表达系统存在一些翻译后修饰,如糖基化等,使其等电点发生改变。

能具体说说会有什么样的改变吗?
自己好好的!
5楼2014-05-22 13:27:24
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lim1896

超级版主

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为宿主菌自身还会有许多蛋白的表达,酵母本身也是有些许分泌蛋白的表达,另外,死亡菌体也会释放一些蛋白,所以便造成了杂蛋白的存在;再者,使用大肠杆菌表达时,若不是表达的分泌蛋白,需要对菌体破壁获得目的蛋白,这样又造成了杂蛋白含量的上升。
再说到杂蛋白的种类,因为不同的表达体系,不同的菌种,自身的蛋白组成是有区别的,所以杂蛋白的含量和一些种类会有区别,简单来讲,鱼肚子里的东西和人肚子里的东西虽然有些东西是一样的,但是二者的区别也是很明显的,具体的,应该不用多说了吧
希望对楼主有用
2楼2014-05-20 10:20:40
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happyhwb

主管区长

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可能是酵母表达系统存在一些翻译后修饰,如糖基化等,使其等电点发生改变。
3楼2014-05-20 18:16:53
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xzgood8888

兑换贵宾

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引用回帖:
2楼: Originally posted by lim1896 at 2014-05-20 10:20:40
因为宿主菌自身还会有许多蛋白的表达,酵母本身也是有些许分泌蛋白的表达,另外,死亡菌体也会释放一些蛋白,所以便造成了杂蛋白的存在;再者,使用大肠杆菌表达时,若不是表达的分泌蛋白,需要对菌体破壁获得目的蛋 ...

同意大侠的说法,但我想问的是不同表达系统所产生的杂质各有什么特质,比如CHO 的HCP通常为酸性蛋白,聚体通常疏水性能很强等这类可以供选择层析方法时考虑的特点。
自己好好的!
4楼2014-05-22 13:26:14
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