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xzgood8888

铁虫 (小有名气)

[求助] 求教大肠与酵母表达后的杂质问题~ 已有1人参与

如题，为什么同样表达一种蛋白，但使用了不同表达系统——大肠杆菌和毕赤酵母，后续的纯化工艺中一个使用了阴离子交换一个用的是阳离子交换？而且都是Binding-elute模式？是两种表达体系产生的杂质不同吗？这些杂质各有什么特点呢?请各位大侠解答~~
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自己好好的!
1楼 2014-05-19 17:34:51
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lim1896

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为宿主菌自身还会有许多蛋白的表达，酵母本身也是有些许分泌蛋白的表达，另外，死亡菌体也会释放一些蛋白，所以便造成了杂蛋白的存在；再者，使用大肠杆菌表达时，若不是表达的分泌蛋白，需要对菌体破壁获得目的蛋白，这样又造成了杂蛋白含量的上升。
再说到杂蛋白的种类，因为不同的表达体系，不同的菌种，自身的蛋白组成是有区别的，所以杂蛋白的含量和一些种类会有区别，简单来讲，鱼肚子里的东西和人肚子里的东西虽然有些东西是一样的，但是二者的区别也是很明显的，具体的，应该不用多说了吧
希望对楼主有用
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2楼2014-05-20 10:20:40
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happyhwb

木虫 (初入文坛)
可能是酵母表达系统存在一些翻译后修饰，如糖基化等，使其等电点发生改变。
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3楼2014-05-20 18:16:53
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xzgood8888

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lim1896 at 2014-05-20 10:20:40
因为宿主菌自身还会有许多蛋白的表达，酵母本身也是有些许分泌蛋白的表达，另外，死亡菌体也会释放一些蛋白，所以便造成了杂蛋白的存在；再者，使用大肠杆菌表达时，若不是表达的分泌蛋白，需要对菌体破壁获得目的蛋 ...

同意大侠的说法，但我想问的是不同表达系统所产生的杂质各有什么特质，比如CHO 的HCP通常为酸性蛋白，聚体通常疏水性能很强等这类可以供选择层析方法时考虑的特点。
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自己好好的!
4楼2014-05-22 13:26:14
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xzgood8888

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by happyhwb at 2014-05-20 18:16:53
可能是酵母表达系统存在一些翻译后修饰，如糖基化等，使其等电点发生改变。

能具体说说会有什么样的改变吗？
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自己好好的!
5楼2014-05-22 13:27:24
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eroitoei

新虫 (正式写手)
显然是表达系统不一样
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6楼2014-05-22 16:09:09
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happyhwb

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xzgood8888 at 2014-05-22 13:27:24
能具体说说会有什么样的改变吗？...

酵母中存在糖基化修饰（-N糖基化、-O糖基化），糖基化的结果会使蛋白带上唾液酸，从而蛋白等电点降低。此外，你用不同的表达系统，不知道是否有带标签，如果带的标签不一样（如果没有切除标签)，也会影响蛋白的一些性质。
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7楼2014-05-22 18:47:42
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heylixing

铁虫 (正式写手)
酵母的糖基化杂质特别麻烦
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8楼2014-05-29 20:53:57
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eroitoei

新虫 (正式写手)
两种表达体系产生的杂质不同
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9楼2014-05-30 12:09:43
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