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周志惠

新虫 (小有名气)

[求助] 电转一次重组菌问题,请教大家 已有2人参与

将pk18mobsacB-△pgi质粒电转化进入谷氨酸棒杆菌中,在Km10平板上长出的一次重组菌都是谷氨酸棒杆菌,且没有杂菌,但是提基因组经PCR验证,没有出现△pgi大小的条带,而只有没有敲除的pgi条带,以前电转从来没有遇到这样的现象,请大家帮忙看看是什么原因呢?万分感谢!
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-23 09:17:00
抗性失效了,还是浓度太低了,还是本身这个菌就对Km有一定的抗性,长出来的就不是重组菌,而是原菌。我也出现过这样的问题,也找不出原因。
2楼2014-06-16 11:06:36
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-06-16 11:06:36
抗性失效了,还是浓度太低了,还是本身这个菌就对Km有一定的抗性,长出来的就不是重组菌,而是原菌。我也出现过这样的问题,也找不出原因。

那请问后来这个问题怎么解决的呢
3楼2014-07-18 21:14:45
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有原菌的话   那不就是没有完全敲除吗
4楼2014-07-19 10:41:49
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-19 10:41:49
有原菌的话   那不就是没有完全敲除吗

关键是有时候又是正常的
5楼2014-07-19 18:59:35
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 周志惠 at 2014-07-18 21:14:45
那请问后来这个问题怎么解决的呢...

我觉得如果这个菌的电转条件很成熟的话  那就继续电转,如果不成熟  那就要靠运气了
6楼2014-07-23 08:44:35
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angellover11

新虫 (小有名气)

请问你这个问题最后解决了吗?同求一些问题
7楼2015-05-15 22:45:07
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by angellover11 at 2015-05-15 22:45:07
请问你这个问题最后解决了吗?同求一些问题

重新提质粒再转,把什么都重新做
8楼2015-05-16 11:21:37
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