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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 电转一次重组菌问题，请教大家
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周志惠

新虫 (小有名气)

[求助] 电转一次重组菌问题，请教大家 已有2人参与

将pk18mobsacB-△pgi质粒电转化进入谷氨酸棒杆菌中，在Km10平板上长出的一次重组菌都是谷氨酸棒杆菌，且没有杂菌，但是提基因组经PCR验证，没有出现△pgi大小的条带，而只有没有敲除的pgi条带，以前电转从来没有遇到这样的现象，请大家帮忙看看是什么原因呢？万分感谢！
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1楼 2014-05-18 11:16:45
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-23 09:17:00
抗性失效了，还是浓度太低了，还是本身这个菌就对Km有一定的抗性，长出来的就不是重组菌，而是原菌。我也出现过这样的问题，也找不出原因。
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2楼2014-06-16 11:06:36
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-06-16 11:06:36
抗性失效了，还是浓度太低了，还是本身这个菌就对Km有一定的抗性，长出来的就不是重组菌，而是原菌。我也出现过这样的问题，也找不出原因。

那请问后来这个问题怎么解决的呢
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3楼2014-07-18 21:14:45
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有原菌的话   那不就是没有完全敲除吗
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4楼2014-07-19 10:41:49
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-19 10:41:49
有原菌的话   那不就是没有完全敲除吗

关键是有时候又是正常的
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5楼2014-07-19 18:59:35
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 周志惠 at 2014-07-18 21:14:45
那请问后来这个问题怎么解决的呢...

我觉得如果这个菌的电转条件很成熟的话  那就继续电转，如果不成熟  那就要靠运气了
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6楼2014-07-23 08:44:35
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angellover11

新虫 (小有名气)
请问你这个问题最后解决了吗？同求一些问题
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7楼2015-05-15 22:45:07
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by angellover11 at 2015-05-15 22:45:07
请问你这个问题最后解决了吗？同求一些问题

重新提质粒再转，把什么都重新做
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8楼2015-05-16 11:21:37
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