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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR连接后菌液鉴定的问题
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哈皮Bingo

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR连接后菌液鉴定的问题 已有10人参与

PCR连接完成后，质粒转化入感受态细胞培养出单菌落后，进行菌液鉴定并跑胶，出现的条带大小是不是应该是目的片段加两引物大小？
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1楼 2014-05-13 15:52:51
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哈皮Bingo

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-05-13 21:42:11
就是菌液PCR，条带是目的片段加两引物大小...

请问一下，是加上下游引物吗？这个不应该是一条是上游引物加目的片段和另一条下游引物加目的片段吗？环状质粒中间一段目的片段，分别由两个方向扩增，就像下图这样：
关于PCR连接后菌液鉴定的问题
无标题.png
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13楼2014-05-15 11:38:28
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

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哈皮Bingo(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-13 17:59:15
条带大小应该是你PCR目的片段加酶切后质粒之和，引物一般只有20几bp，建议你用提取出来的质粒为模版，用你PCR的上下游引物进行PCR，能P出条带说明连接上了，之后最好送去测序，看有没有位点突变。（你提问很模糊，你是不是就是做的菌液PCR？）
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2楼2014-05-13 16:05:11
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亦逐日

金虫 (小有名气)
PCR连接完成？好难啊
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道可道，非常道
3楼2014-05-13 16:18:46
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
哈皮Bingo(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-13 17:59:33
看你用什么载体了，载体上两引物之间的距离加片段长度即可

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-05-13 17:32:57
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