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kingsa木虫 (正式写手)
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Western曝光后无条带，跪求指教！！！ 已有12人参与
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最近几次Wetern Blot曝光后，发现只有膜的四周有些黑色，中间完全没有条带。 跪求各位大神指教！！！ 曝光条带说明： 前两条分别为12%和15%分离胶分离的目的条带，只有膜的四周有些黑色，中间完全没有条带 后两条分别为12%和15%分离胶分离的β-actin条带；前者只有膜的四周有些黑色而中间完全没有条带，后者完全曝不出来 实验条件说明： 配胶试剂和marker应该没有问题，电泳液、电转液、TBST等试剂都是新配。 转膜之后，膜上的marker条带非常清晰，转膜应该没有问题的。 目的蛋白分子量为18KD，我剪的膜覆盖了marker 10-25 KD；β-actin分子量为43KD，我剪的膜覆盖了marker 35-55 KD 目的蛋白抗体购自Santa Cruz，给的稀释比例建议是100-1000，我用的是1：300(新配)；β-actin和二抗按说明书稀释至1:5000 曝光时间从30s延长到10min，条带几乎没什么变化 跪求指教啊！！！  marker.jpg  曝光条带.jpg |
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