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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

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[求助] mRNA的二级结构问题急急急！

最近在扩增一个基因用于蛋白表达，基因长约1700bp，扩了好长时间就是死活扩不出来！真心无语了。考虑用重叠延伸法进行扩增，设计了两对引物，第一对引物扩增约前1000bp，结果扩出来了；第二对引物扩增后700bp，，，，真心无语了，做了14个样，PCR只有一个样扩出来了。。。师兄说该基因mRNA下游可能存在二级结构，影响了PCR。可是，如果存在二级结构，在PCR过程中，二级结构的碱基配对不会断开吗？这样应该也不会影响扩增吧。另外，求教怎样判断mRNA中存在碱基配对或者二级结构。（本人扩增基因模板为cDNA）不胜感激！！！！

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