应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请问有人用双酶切过petduet-1载体吗？用bamHI和Hind3 双酶切
51/1返回列表
查看: 1627  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

飘零星lin

金虫 (小有名气)

[求助] 请问有人用双酶切过petduet-1载体吗？用bamHI和Hind3 双酶切 已有2人参与

用bamHI和Hind3 双酶切空载体petduet-1，thermo公司的酶，怎么才可以知道切完全？我要将一个300bp的小片段insert,转化后电泳一直条带位置不对，理论应该跑得更慢，结果比原质粒跑快了很多。不明所以。求经验分享！谢谢大家。在转化之前有没有什么办法判断酶切成功？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-07 12:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-07 19:06:03
引用回帖:
4楼: Originally posted by 飘零星lin at 2014-05-07 17:27:46
pcr目的片段用同一条件双酶切可以看到切下来的100多bp,是否可以证明同一条件酶切的空载体也酶切完全？另外，我跑电泳的时候，30min的时候我看到条带位置在5000以下，但是再跑10min条带位置在5000以上，这样正常吗？...

问题一：不一定，因为你加的PCR片段浓度和你载体浓度不等
问题二：如果是在5000上下相差不远的话，是在正常范围内
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-05-07 18:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 15:25:03
转化之前证实双酶切完全与否不太容易，因为空载体的双酶切与单酶切在普通电泳上很难区分开，那个小片段很可能跑不出条带，PAGE电泳可以试试
赞一下 回复此楼
只有不断地失败才会成功
2楼2014-05-07 15:16:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-07 19:05:59
你先提高酶切质粒和酶切目的片段浓度，按你的经验觉得切开后，T4连接酶连接过夜，然后跑胶，你会看见不同的几条带，有自连的，有没连接上的目的片段和载体片段，有你需要连接有目的片段的载体，然后根据你的bp量大小，胶回收所需条带，再转染感受态，涂板，培养，这样试试看。
  希望对你有帮助。
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-07 16:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零星lin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-05-07 16:17:57
你先提高酶切质粒和酶切目的片段浓度，按你的经验觉得切开后，T4连接酶连接过夜，然后跑胶，你会看见不同的几条带，有自连的，有没连接上的目的片段和载体片段，有你需要连接有目的片段的载体，然后根据你的bp量大小 ...

pcr目的片段用同一条件双酶切可以看到切下来的100多bp,是否可以证明同一条件酶切的空载体也酶切完全？另外，我跑电泳的时候，30min的时候我看到条带位置在5000以下，但是再跑10min条带位置在5000以上，这样正常吗？
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-07 17:27:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 18:58 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭