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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做土壤微生物样品的16s rDNA pcr 为什么会出现两条带？？引物27f 1492r
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琪瑶儿

金虫 (小有名气)

[求助] 做土壤微生物样品的16s rDNA pcr 为什么会出现两条带？？引物27f 1492r 已有5人参与

想做土壤微生物样品的16s 克隆文库，结果用27f 1492r pcr产物两条带， 一条在1500bp 为目的条带，另外一条在100-250之间 ，这是什么原因，我需要怎么调整才能进行下一步实验？
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1楼 2014-05-07 10:58:39
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是引物二聚体，可以适当调整加入的引物量，对目的条带可以切胶回收纯化
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天生自弃难丽质
6楼2015-04-20 14:27:52
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gutong1117

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 15:40:26
99%的可能性是被污染了。BUFF，NTP，酶，水全部都换成新的。如果LZ想知道是哪里污染了可以一个个试。
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2楼2014-05-07 11:18:14
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litongtongti

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 15:40:32
小的片段是引物二聚体吧，提高下退货温度试试。或者你切胶回收目的片段，感觉没什么影响！
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3楼2014-05-07 15:34:56
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Donnawang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也觉得可能是引物二聚体，不影响，
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4楼2014-06-16 09:32:34
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