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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 谁用过pEarleyGate 103做拟南芥的瞬时表达，这个载体好用吗？
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)

[求助] 谁用过pEarleyGate 103做拟南芥的瞬时表达，这个载体好用吗？ 已有1人参与

本人准备用这个载体做亚细胞定位，预测的位置在叶绿体上，请问有没有人用过这个载体，提供一点经验呢，在此不胜感激！还有做这个怎么做阳性对照呢？
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1楼 2014-05-06 21:27:09
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 00:27:36
这个载体是35S启动子加gateway系统，连接GFP和HIS标签，可以用western检测蛋白表达。做瞬时表达亚细胞定位没有问题。但由于是35S强启动子，可能你需要注意目的蛋白过表达是否对正常定位尤其是叶绿体定位有影响，我没有做过叶绿体相关蛋白，所以无法确定。至于阳性对照，叶绿体本身有自发荧光，>650 nm可以观察到，拿这个可以做一个定位对照。
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2楼2014-05-06 23:03:53
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-06 23:03:53
这个载体是35S启动子加gateway系统，连接GFP和HIS标签，可以用western检测蛋白表达。做瞬时表达亚细胞定位没有问题。但由于是35S强启动子，可能你需要注意目的蛋白过表达是否对正常定位尤其是叶绿体定位有影响，我没 ...

谢谢，听说载体太大会很难转进去吗？还有这个空载体会不会表达GFP呢？听说有的载体是会的。
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3楼2014-05-08 13:45:05
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)
自己顶一下！
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4楼2014-05-08 17:55:31
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starseacow

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引用回帖:
3楼: Originally posted by ~春梦秋云~ at 2014-05-08 13:45:05
谢谢，听说载体太大会很难转进去吗？还有这个空载体会不会表达GFP呢？听说有的载体是会的。...

你可以空转载体到发根农杆菌里，瞬时转植物做对照
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5楼2014-05-08 19:02:00
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-08 19:02:00
你可以空转载体到发根农杆菌里，瞬时转植物做对照...

亲不是应助帖，不能给你评分哦！
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6楼2014-05-12 10:57:50
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)
都没有人做瞬时表达吗？大家多多提意见啊！
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7楼2014-05-12 10:58:35
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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-08 19:02:00
你可以空转载体到发根农杆菌里，瞬时转植物做对照...

根不是会自发绿色荧光吗？而且很强，前几天刚看了根。这个要怎么去除？

发自小木虫Android客户端
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8楼2017-01-01 10:26:57
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 逗逼庄庄 at 2017-01-01 10:26:57
根不是会自发绿色荧光吗？而且很强，前几天刚看了根。这个要怎么去除？
...

在培养和侵染过程中，尽量减少对根的机械损伤。
准备对照，激光共聚焦，在阳性对照，未侵染和阴性对照间仔细调试，寻找最佳测定参数。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2017-01-01 16:32:21
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