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~春梦秋云~

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[求助] 谁用过pEarleyGate 103做拟南芥的瞬时表达，这个载体好用吗？已有1人参与

本人准备用这个载体做亚细胞定位，预测的位置在叶绿体上，请问有没有人用过这个载体，提供一点经验呢，在此不胜感激！还有做这个怎么做阳性对照呢？

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1楼 2014-05-06 21:27:09

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starseacow

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这个载体是35S启动子加gateway系统，连接GFP和HIS标签，可以用western检测蛋白表达。做瞬时表达亚细胞定位没有问题。但由于是35S强启动子，可能你需要注意目的蛋白过表达是否对正常定位尤其是叶绿体定位有影响，我没有做过叶绿体相关蛋白，所以无法确定。至于阳性对照，叶绿体本身有自发荧光，>650 nm可以观察到，拿这个可以做一个定位对照。

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2楼2014-05-06 23:03:53

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2楼: Originally posted by starseacow at 2014-05-06 23:03:53
这个载体是35S启动子加gateway系统，连接GFP和HIS标签，可以用western检测蛋白表达。做瞬时表达亚细胞定位没有问题。但由于是35S强启动子，可能你需要注意目的蛋白过表达是否对正常定位尤其是叶绿体定位有影响，我没 ...

谢谢，听说载体太大会很难转进去吗？还有这个空载体会不会表达GFP呢？听说有的载体是会的。

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相信黎明不会失约，相信付出必有回报！

3楼2014-05-08 13:45:05

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