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liuyil

银虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙看下,这个拖带这么严重,但是视乎没有条带,什么情况?是不是加的量太大了?已有1人参与

大家帮忙看下,这个拖带这么严重,但是视乎没有条带,什么情况?是不是加的量太大了?两边是一些随机连接的DNA片段,大小不一,大家出出注意!

大家帮忙看下,这个拖带这么严重,但是视乎没有条带,什么情况?是不是加的量太大了?
Administrator 2014-04-24 21hr 26min.jpg
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未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 14:12:07
是的,之前也是您帮我解答的,听了您的建议。真的真的很感谢您这么真心的帮我,我真的是道行很浅,请原谅。我不是一定要去评估连接的效率,只是想看能不能通过连接反应后的电泳图大致判断下连接片段的长度,后续进 ...

呀呀,别搞这么客气,能解决问题就行
一般而言连接产物看不大出来大小的,你若想看大小,直接TA克隆了,用菌落PCR在你得到的克隆里面看,这个也能反映问题。
就是这有一点bias,小片段更容易连接,你要是较真,可以分段回收之后分别克隆。
如果只是大小不一,通过纯化DNA产物,用合适分辨率的胶,还是可以看清楚的
但是现在你这里面肯定有很多环化的产物,片段不太长的时候环化的比线性的跑得快,他在里面一搅合,你就搞不清楚了。
13楼2014-04-25 14:26:26
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liuyil

银虫 (小有名气)

补充:这里面还有连接酶这些,连接后的产物,未纯化,只是想先跑个胶看下条带的分布,谢谢
未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
2楼2014-04-25 10:29:29
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liuyil

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 03:29:29
补充:这里面还有连接酶这些,连接后的产物,未纯化,只是想先跑个胶看下条带的分布,谢谢

补充:连接体系中是一些长度在20-70 bp的DNA小片段,然后在T4 DNA连接酶的作用下进行连接,14 度,24 h,将连接产物直接跑1%的琼脂糖电泳,图就这样了,打下们帮忙分析下!
未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
3楼2014-04-25 11:54:44
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

@天使托   @blackrose8089   @凌波丽   @cicelyzh   @biostar2009   帮忙解决一下
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-04-25 12:46:05
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