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liuyil

银虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙看下,这个拖带这么严重,但是视乎没有条带,什么情况?是不是加的量太大了? 已有1人参与

大家帮忙看下,这个拖带这么严重,但是视乎没有条带,什么情况?是不是加的量太大了?两边是一些随机连接的DNA片段,大小不一,大家出出注意!

大家帮忙看下,这个拖带这么严重,但是视乎没有条带,什么情况?是不是加的量太大了?
Administrator 2014-04-24 21hr 26min.jpg
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未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
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liuyil

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-25 06:35:24
能不能出现ladder,还是smear,这取决于你的检测系统的分辨率,更取决于你的DNA单体的大小分布,且不谈还有单链和环状产物的问题。
你要是20-70,比如5bp间隔分布的,别说连接之后,你就是连接之前,用agarose ge ...

是的,之前也是您帮我解答的,听了您的建议。真的真的很感谢您这么真心的帮我,我真的是道行很浅,请原谅。我不是一定要去评估连接的效率,只是想看能不能通过连接反应后的电泳图大致判断下连接片段的长度,后续进行纯化再连接载体转化,由于对于基础知识的欠缺,所以可能说了些蠢话惹你生气了,抱歉哈!
未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
11楼2014-04-25 14:12:07
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liuyil

银虫 (小有名气)

补充:这里面还有连接酶这些,连接后的产物,未纯化,只是想先跑个胶看下条带的分布,谢谢
未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
2楼2014-04-25 10:29:29
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liuyil

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 03:29:29
补充:这里面还有连接酶这些,连接后的产物,未纯化,只是想先跑个胶看下条带的分布,谢谢

补充:连接体系中是一些长度在20-70 bp的DNA小片段,然后在T4 DNA连接酶的作用下进行连接,14 度,24 h,将连接产物直接跑1%的琼脂糖电泳,图就这样了,打下们帮忙分析下!
未来不知道会怎么样,做好当下最重要。
3楼2014-04-25 11:54:44
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

@天使托   @blackrose8089   @凌波丽   @cicelyzh   @biostar2009   帮忙解决一下
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-04-25 12:46:05
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