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大家帮我看看我的overlap怎么回事? 已有1人参与
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我想把gene1和gene2 通过linker链接起来,做法是gene1-linker-gene2或者gene2-linker-gene1,两种方法分别拿到片段,如下图1, 然后扩增全长时出现了问题,如图2所示,请大侠分析一下,如何改善?谢谢 140412-Vgb+P(5 TUBE)-分段PCR副本.jpg 2014413-PCR2全长副本.jpg |
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【答案】应助回帖
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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-14 11:42:47
wncgliu86: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-17 14:44:08
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你的gene2的片段有些杂条带,建议做一下切胶回收之后在进行拼接 还有就是在拼接的时候要测定DNA的浓度,算出moler比例,要保证两个片段的摩尔比例为1:1 如果无法测定浓度的话,就要多实验几个浓度的比例条件,看一下效果 拼接的时候,引物的浓度要低,可以实验一下采用正常浓度的1/10(可以扩展出来),有助于拼接 |
2楼2014-04-14 11:25:04













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