应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 请问在大肠杆菌中表达蛋白时会不会只表达一段目的蛋白？怎么解决呢？求高人指点
132/2返回列表上一页12
查看: 2987  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

woolley

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能详细解释下：
”目的蛋白总长度为27.6kD，但跑胶却总是只能得到20kD的主条带，质谱显示只有sumo和那116个里面的前面一截目的蛋白，后面的都对不上“
蛋白在SDS-PAGE上显示比实际要小是常见的现象
你进行质朴测序了吗，怎么知道后面的都对不上？
如果有部分测序的结果，那么分析起来就好很多，移码突变的话，一个方向就三种可能，一种是你的正确序列，还有两种是突变序列，你看看你质谱出来的序列是不是和突变序列一致，如果一致的话就是移码突变，那么，就去看是在哪个位置开始的移码，然后用同义密码子替换啥的，看看有没有效果。
赞一下 回复此楼
11楼2014-04-14 11:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cassiett90

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by pennchem at 2014-04-13 22:31:38
C-端加入SUMO，N端加入HIS，或者反过来，这样你就可以把你的蛋白夹在两者中间，SUMO纯化的保证C端完整，HIS纯化保证N端完整，不是让你两次表达。

哦哦~可以试一下，可是我加sumo的目的是想帮助蛋白的折叠，不知道这样子还可以帮助不呢。。
赞一下 回复此楼
12楼2014-04-14 15:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

resurgam

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cassiett90 at 2014-04-13 22:13:20
嗯嗯 这么做过的 提了质粒 测序还是没问题 表达还是不对。。为什么会移码突变呢？原因可能有什么呢？从质粒的碱基序列来看 是没有移码的，我一个个看了的呢...

表达的蛋白比预计的要小，可能是降解，但你又说：“质谱显示只有sumo和那116个里面的前面一截目的蛋白，后面的都对不上”所以推测是移码突变了，可能插入了1个或2个碱基也可能删除了1个或2个碱基，导致从移码突变位点后的所有氨基酸都变了。
如果你的蛋白仅仅是降解，那么按照10楼的设计，你是可以用western判断的。但如果是突变，除了测序也木有办法了。
你确定你质谱打的没问题？另，序列比对建议用相关软件，还是不要自己一个一个碱基的看了。
赞一下 回复此楼
13楼2014-04-14 22:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cassiett90 的主题更新
132/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭