至尊木虫 (知名作家)
逆水行舟，不进则退 ![]()
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【答案】应助回帖
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糖包子007: 金币+10, 博学EPI+1, 谢谢 我需要的是高效液相色谱所作的标准曲线 2014-04-04 12:17:48
以下是本人查到的相关资料，希望可以帮到你 （另附标准曲线制作图表）
标准曲线是溶液中氨基酸浓度与溶液吸光度关系的函数曲线。
一般浓度越大，吸收度越高，肯定是正比例曲线，关键还是要看看你是如何测定的？测定数据是什么，测定出的数据的线性如何？
线性非常重要啊，一定要计算一下注明啊，否则一切白搭。
OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法里出现的专有名词 :光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
那么10mm比色皿测得OD值就应该是5mm比色皿测得OD值的2倍.
国标实验方法：
分别吸取0.0,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml氨基酸工作液于一组25ml容量瓶中，各加水4ml,加水至4ml比较好
，ph8.0磷酸缓冲液0.5ml和2%茚三酮溶液0.5ml,在沸水加热15min,，冷却改为迅速冷却
后加水定容至25ml,放置10min后,用5mm比色杯在570nm处测定吸光度.将测得的吸光度与相应的谷基酸浓度绘制标准曲线.
谷氨酸标准液:称取100mg的谷氨酸(纯度不低于99%)溶于100ml水中,作为母液.准确吸取5ml母液,加水定容至50ml作为工作液(1ml含谷氨酸0.1mg)
试液配制部分请再核查:
pH8.0磷酸盐缓冲液:
按GB 8313—87《茶 茶多酚测定》中3.2的规定,配制1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和
1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95mL和1/15M磷酸二氢
钾溶液5mL,混匀。
3.2 2％茚三酮溶液: 称取水合茚三酮(纯度不低于99％)2g,加50mL水和80mg氯化亚锡
(GB638—78,分析纯),搅拌均匀。分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水
定容至100mL。茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入0.25g 活性炭，轻轻搅拌。加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
注: 制作标准曲线时,所用蒸馏水,必须是二次蒸馏水。
实验遇到失败应该是操作或试剂引起的，我认为最有可能出错的地方有两个：
1. 移取液体时是否是用移液管移的或者是用移液枪移的，特别要提醒的是移液枪会因吸头的影响而导致加样量不准。
2. 沸水加热时是否会蒸干，因为里面溶液量并不多，15分钟可能会蒸发大量水分，使部分茚三酮和氨基酸析出并附在容量瓶壁上而未参加反应。我认为加热时应该把盖子盖上，虽然会被蒸汽冲开，但应马上盖回去，并在加热过程中最好偶尔摇动。 |
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- 附件 1 : 氨基酸标准曲线.xls
2014-04-01 18:36:32, 14.5 K
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