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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 夹心ELISA方法的建立
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] 夹心ELISA方法的建立 已有3人参与

请各位前辈帮忙，本人要做夹心ELISA，打算要用鼠源多抗包被，HRP标记的单抗去检。单抗用辛酸-硫酸铵进行粗纯，想问下，多抗用进行纯化么？单抗还用过柱子再纯化么？
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微笑，自信，加油
1楼 2014-03-27 22:12:57
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xiaxzhp

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+1 2014-03-28 12:56:21
有条件还是需要再纯化一下。未经纯化，可能对试剂盒灵敏度、检测样本上有一定的影响。
当然，我们有时候用单抗的时候，是直接使用腹水的，但前提是不影响试剂盒指标的情况下。
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2楼2014-03-28 11:51:32
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ahchljctw

新虫 (小有名气)
请问楼主，夹心法，多抗或单抗包被孔板有什么区别么？
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Stayhungry,stayfoolish
3楼2014-10-15 23:52:58
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laowuxu7891

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by ahchljctw at 2014-10-15 23:52:58
请问楼主，夹心法，多抗或单抗包被孔板有什么区别么？

优先选用单抗包被，抗原与单抗结合时抗原抗体结合物方位就会一致，使抗原其它决定族朝向一致，有利于检测抗体(多抗)与抗原的结合

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laowuxu7891
4楼2014-10-16 09:39:06
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ahchljctw

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

非常感谢！我用的sandwich elisa，标准品100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625， 0ng/ml 八个梯度,测发酵液中目标蛋白浓度，为什么结果差异太大？同一样品，2次检出结果不一致
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Stayhungry,stayfoolish
5楼2014-10-16 10:23:07
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laowuxu7891

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ahchljctw at 2014-10-16 10:23:07
非常感谢！我用的sandwich elisa，标准品100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625， 0ng/ml 八个梯度,测发酵液中目标蛋白浓度，为什么结果差异太大？同一样品，2次检出结果不一致

怎么个不一致法？你要确保包被到读数操作条件完全一致，各个步骤试剂要一致，等。样品是否反复冻融等等，很多因素会影响实验结果。不知道具体情况不好分析
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laowuxu7891
6楼2014-10-16 10:39:45
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ahchljctw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by laowuxu7891 at 2014-10-16 10:39:45
怎么个不一致法？你要确保包被到读数操作条件完全一致，各个步骤试剂要一致，等。样品是否反复冻融等等，很多因素会影响实验结果。不知道具体情况不好分析...

这个我知道，每次实验的差异不可避免，但我的就是相差太大了，例如，同样的发酵液今天测的蛋白浓度1.34mg/ml,明天测就变成5.32mg/ml，
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Stayhungry,stayfoolish
7楼2014-10-16 22:47:27
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