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wangdunzju新虫 (小有名气)
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拟南芥蛋白互作非特异条带怎么解决？
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各位虫友好！ 最近在做拟南芥的蛋白互作时遇到问题，请教大家： 用拟南芥叶片液氮磨样，4度5000G离心5分后，用Pierce公司的Co-IP试剂盒做免疫共沉淀实验，完全按照说明书操作的，结果Control Gel（阴性对照组）中总是出现非特异性条带，样品组中的条带与Control Gel（阴性对照组）中的条带完全一样！按说阴性对照组里应该没有太明显的条带才对啊？但实际上Control Gel（阴性对照组）中的条带十分明显，就跟目的样品中的一个样，会不会是出厂时厂家把Control Gel装错了呢（感觉可能性不大）？尝试增加复合物的洗涤次数（到10次以上了）并且wash buffer 中有加入0.5%的triton X-100,都没有效果。而且样品也用Control Gel预处理了，都没能解决问题，阴性对照组的非特异性结合还是很强，这怎么办呢？急啊！！！   另外，抗体是兔抗血清，做Wb实验用过，特异性蛮好的。可以杂到43Kd的目的蛋白。 洗脱复合物的银染如图: 问题： 1，如何减少阴性对照中的非特异性结合？ 2，看到的两个主带该不会是把抗体洗脱下来了吧？  Co-IP.jpg |
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