| 查看: 1170 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
wangdunzju新虫 (小有名气)
|
[求助]
拟南芥蛋白互作非特异条带怎么解决？
|
|
|
各位虫友好！ 最近在做拟南芥的蛋白互作时遇到问题，请教大家： 用拟南芥叶片液氮磨样，4度5000G离心5分后，用Pierce公司的Co-IP试剂盒做免疫共沉淀实验，完全按照说明书操作的，结果Control Gel（阴性对照组）中总是出现非特异性条带，样品组中的条带与Control Gel（阴性对照组）中的条带完全一样！按说阴性对照组里应该没有太明显的条带才对啊？但实际上Control Gel（阴性对照组）中的条带十分明显，就跟目的样品中的一个样，会不会是出厂时厂家把Control Gel装错了呢（感觉可能性不大）？尝试增加复合物的洗涤次数（到10次以上了）并且wash buffer 中有加入0.5%的triton X-100,都没有效果。而且样品也用Control Gel预处理了，都没能解决问题，阴性对照组的非特异性结合还是很强，这怎么办呢？急啊！！！   另外，抗体是兔抗血清，做Wb实验用过，特异性蛮好的。可以杂到43Kd的目的蛋白。 洗脱复合物的银染如图: 问题： 1，如何减少阴性对照中的非特异性结合？ 2，看到的两个主带该不会是把抗体洗脱下来了吧？  Co-IP.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有65人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有8人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教提取拟南芥叶片总蛋白SDS-PAGE时较亮的条带对应的蛋白？
已经有29人回复
- 求南京大学国基名单
已经有5人回复
- 生物信息学专题－生物版，医学版和信息科学版共同创建
已经有87人回复
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
5楼2014-03-28 08:54:09
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
2楼2014-03-27 15:38:48
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2014-03-27 15:40:06
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
4楼2014-03-27 16:00:20
5