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yumupeipei铜虫 (小有名气)
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细胞复苏 已有2人参与
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一周前，复苏了一管甜菜夜蛾中肠脂肪体细胞，不知为何，细胞仍未出现贴壁现象。在倒置显微镜下观察时，细胞的外形特征较正常细胞并无异样，培养基中悬浮的细胞浓度很大，较活化时的透光率低，但培养瓶底物无贴壁的细胞出现（将瓶子竖立时，培养瓶底部的细胞也会随着培养液向下滑动 ），请问各位前辈，为何会出现这种情况？如何提高细胞的贴壁率？这批细胞还有必要传代吗？倘若传代的话是否按照悬浮细胞的方法传？谢谢！补充：培养基为sigma的Hink's TNM-FH昆虫培养基，外加10%的牛血清，100单位/ml的青链霉素，培养温度为27度。 |
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肖颖2009
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【答案】应助回帖
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yumupeipei: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-27 08:18:23
silicare: BioEPI+1 2014-03-27 09:34:25
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silicare: BioEPI+1 2014-03-27 09:34:25
| 楼上说的都很对啊，我再补充一些。复苏的细胞要在37度水浴锅里解冻。细胞完全解冻后不要在水浴锅里过长时间的放置，那样对细胞不好。解冻后细胞转移至离心管（我们用的是15ml的离心管）再加5ml的预热了的完全培养基，然后离心。离心的转速可以在1000~1500rpm之间。离心完之后的步骤可以按照楼上说的去做~还有一点，细胞冻存之前的状态会直接影响复苏的效果，所以你冻细胞的时候要保证细胞状态很不错再冻比较好。最后 祝你下次复苏细胞成功哦~！ |
yumupeipei7楼2014-03-26 16:21:38
yumupeipei
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