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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

[求助] 细胞复苏 已有2人参与

一周前,复苏了一管甜菜夜蛾中肠脂肪体细胞,不知为何,细胞仍未出现贴壁现象。在倒置显微镜下观察时,细胞的外形特征较正常细胞并无异样,培养基中悬浮的细胞浓度很大,较活化时的透光率低,但培养瓶底物无贴壁的细胞出现(将瓶子竖立时,培养瓶底部的细胞也会随着培养液向下滑动),请问各位前辈,为何会出现这种情况?如何提高细胞的贴壁率?这批细胞还有必要传代吗?倘若传代的话是否按照悬浮细胞的方法传?谢谢!
补充:培养基为sigma的Hink's TNM-FH昆虫培养基,外加10%的牛血清,100单位/ml的青链霉素,培养温度为27度。
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2014-03-26 16:21:38
楼上说的都很对啊,我再补充一些。复苏的细胞要在37度水浴锅里解冻。细胞完全解冻后不要在水浴锅里过长时间的放置,那样对细胞不好。解冻后细胞转移至离心管(我们用的是15ml的离心管)再加5ml的预热了的完全培养基 ...

但是我们细胞间没有水浴锅,唯恐拿出细胞间后,污染的可能性会很大,不敢贸然的尝试。以前我们实验室都是直接用手捂着使其解冻,也没有事先预热培养基,个人感觉效果不是很理想。
不知是否可以将从冰箱取出的细胞和培养基放在37度培养箱中,待其解冻后再离心?
8楼2014-03-27 08:25:04
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

怎么多没有人给建议呢,自己先顶起
2楼2014-03-25 08:30:23
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我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yumupeipei: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-25 14:52:08
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-03-25 17:26:38
建议1-ATCCA上查询该细胞的培养条件,一般细胞是37度
建议2-确定是贴壁细胞吗?如果是,复苏第二天还没有贴壁,可以扔掉了。
建议3-复苏时离心,弃上清,加新培养液,以减小DMSO影响
建议4-看细胞是不是比正常细胞蜷缩了,如果是说明已经死了,死细胞怎么放也不会贴壁了
为爱而生
3楼2014-03-25 14:30:37
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-03-25 14:30:37
建议1-ATCCA上查询该细胞的培养条件,一般细胞是37度
建议2-确定是贴壁细胞吗?如果是,复苏第二天还没有贴壁,可以扔掉了。
建议3-复苏时离心,弃上清,加新培养液,以减小DMSO影响
建议4-看细胞是不是比正常细 ...

谢谢楼主的解答,但是我们没有特别严格的细胞培养间,离心会不会 对细胞产生污染?
4楼2014-03-25 14:51:52
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