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yumupeipei铜虫 (小有名气)
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一周前，复苏了一管甜菜夜蛾中肠脂肪体细胞，不知为何，细胞仍未出现贴壁现象。在倒置显微镜下观察时，细胞的外形特征较正常细胞并无异样，培养基中悬浮的细胞浓度很大，较活化时的透光率低，但培养瓶底物无贴壁的细胞出现（将瓶子竖立时，培养瓶底部的细胞也会随着培养液向下滑动 ），请问各位前辈，为何会出现这种情况？如何提高细胞的贴壁率？这批细胞还有必要传代吗？倘若传代的话是否按照悬浮细胞的方法传？谢谢！补充：培养基为sigma的Hink's TNM-FH昆虫培养基，外加10%的牛血清，100单位/ml的青链霉素，培养温度为27度。 |
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3楼2014-03-25 14:30:37
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2楼2014-03-25 08:30:23
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4楼2014-03-25 14:51:52
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【答案】应助回帖
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yumupeipei: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-25 16:45:16
yumupeipei: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-25 16:45:16
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一台转速可到1500的离心机，放在细胞室。复苏后细胞放入10毫升高温灭菌过的离心管，加培养液稀释（降低DMSO浓度），在超静态内封口膜封好离心管口。1000转每分钟离心5分钟，（如果冻存管内细胞数量够多-比如装了一瓶25平方厘米的培养瓶的细胞）离心后底部会看到一小堆白色细胞，如果觉得转速不够可以逐渐增大。弃上清，用新鲜培养液冲出细胞培养。注意一下，应该不会染菌。我们也是大学里的细胞室，跟外面企业的比起来差得远。不知你的细胞离心会不会受影响~  |
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yumupeipei5楼2014-03-25 16:22:07
