| 查看: 2098 | 回复: 5 | |||
[求助]
平滑肌细胞transwell实验 已有1人参与
|
|
亲爱的虫友们，我现在在做平滑肌细胞transwell实验，具体步骤如下： 1 制作人工基底膜混合液：取出-20?C冻存的Matrigel凝胶，预置4?C融化后，按1：5比将100ulMatrigel与500ul 无血清DMEM培养基混合，整个操作过程在冰上及无菌条件下进行。 2 包被基底膜：Transwell上室多孔Polycarbonate（聚酯碳酸酯）滤膜上加入人工基底膜混合液50ul，37℃平铺胶化2~3h。 3 准备细胞悬液和小室 （1） 消化法从细胞培养瓶中获取细胞：消化、离心和计数后用无血清DMEM培养基制备成单细胞悬液； （2） 上室加入200ul单细胞悬液（细胞数约为1.5×105/室）； （3） 下室加入800ul含20%FBS的DMEM； （4） 装有Transwell小室的24孔板放置37℃、5%CO2的培养箱中培养。 5 染色和计数 培养结束，取出Transwell小室，PBS洗涤3遍（每遍5min）； 4%多聚甲醛室温固定15min，PBS洗涤3遍 ； 用棉签轻轻擦去上层未穿透膜的VSMC； 0.5%结晶紫染色15~30min，PBS洗涤3遍； 风干，揭下滤膜后反贴在载玻片上，用显微镜低倍镜观察，每个滤膜随机选取3个视野，高倍镜（×200）下分别计数3个视野的穿膜细胞数，计算每个视野的平均细胞数。 我觉得以上步骤是没有问题的，但是我取12h和36h的tanswell小室进行染色，一个细胞都看不到，所以在此想请教各位虫友，是不是时间短，细胞没有侵袭下来？还是我没有染上颜色呢？我买的结晶紫是2.5%的结晶紫染液，用ddH2O稀释成0.5%染的，难道是稀释结晶紫的时候不能用ddH2O，得用无水乙醇或是PBS？你们稀释结晶紫是用什么稀释的啊？ 有没有做过平滑肌细胞迁移的战友啊，你们做的时候平滑肌细胞大约多长时间能侵袭下来啊？ 急求围观。。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿浙大生物325分求调剂
已经有4人回复
-
0831一轮调剂失败求助
已经有8人回复
-
本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂
已经有5人回复
-
295分求调剂
已经有12人回复
-
调剂求收留
已经有25人回复
-
272分材料子求调剂
已经有49人回复
-
211本科材料化工求调剂
已经有16人回复
-
279学硕食品专业求调剂院校
已经有12人回复
-
一志愿双非085400电子信息344 求调剂，对材料和化学方向也感兴趣
已经有11人回复
-
279求调剂
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于细胞迁移实验transwell使用的一些操作问题
已经有12人回复
- 求助 关于应用透射电镜观察细胞凋亡 的实验详细步骤
已经有3人回复
- 实验做的郁闷！
已经有13人回复
- 做transwell实验细胞迁不过去 郁闷
已经有7人回复
- 有哪位大侠做过transwell测药物通透性实验？求助啊
已经有5人回复
- 关于Transwell迁移实验的一些问题
已经有28人回复
- 关于细胞毒性实验！
已经有9人回复
- 细胞毒性实验如何选择细胞啊？？新手
已经有9人回复
- 请教做VEGF促进细胞增殖的实验的相关事情
已经有13人回复
- 关于构建细胞实验室的细节问题
已经有35人回复
- transwell invasion实验求助！谢谢！
已经有6人回复
- 有关膜基结合问题
已经有8人回复
- 【专题】分子克隆实验专题--（五）感受态细胞的选择与使用
已经有15人回复
- 【求助/交流】MM培养基
已经有6人回复
- 【求助】取小鼠血管内皮细胞
已经有3人回复
- 香港中文大学李嘉诚健康科学研究所干细胞和功能基因组学实验室 招博士生和实验员
已经有11人回复
- 【求助】细胞实验指南
已经有9人回复
2楼2014-03-19 11:24:33
3楼2014-03-20 08:25:07
4楼2014-03-20 16:28:40
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - BioEPI: 5
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8056.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
5楼2014-03-20 16:30:53
superren
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 263.6
- 帖子: 75
- 在线: 24.3小时
- 虫号: 3019716
- 注册: 2014-03-05
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
6楼2015-03-31 17:51:51
5