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jill900712

金虫 (初入文坛)

[求助] T4 PNK buffer 和T4 ligation buffer可以通用吗 已有1人参与

请问，T4 ligation buffer 和T4 PNK buffer是通用的吗？前者成分中含有ATP，后者不含ATP。如果将两个oligos 进行phosphorylate and anneal步骤，protocol上是用T4 ligation buffer,NEB公司的人说他们的buffer是可以通用的，可是后者buffer里不含ATP 呀？可以直接用T4 PNK buffer吗？
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1楼 2014-03-17 10:02:48
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guifa zhai

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by woolley at 2014-03-17 10:18:27
T4 PNK 可以使用T4 DNA 连接酶的buffer
T4 PNK本身也需要ATP(或其他三磷酸的如TTP等)，T4 PNK的buffer中不含有ATP，主要是因为T4 PNK常用作放射性标记，所以一般使用的时候会添加放射性的ATP等，buffer中就不加入A ...

您好，请问您是将两个酶同时放在一起反应吗？
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3楼2022-01-05 12:39:52
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woolley

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-17 10:33:13
T4 PNK 可以使用T4 DNA 连接酶的buffer
T4 PNK本身也需要ATP(或其他三磷酸的如TTP等)，T4 PNK的buffer中不含有ATP，主要是因为T4 PNK常用作放射性标记，所以一般使用的时候会添加放射性的ATP等，buffer中就不加入ATP了，以免影响标记率。
T4 PNK的说明书中(NEB的)明确说明了，如果后续反应是连接反应的话，可以直接在T4 DNA连接酶的buffer中进行T4 PNK的反应。我们也做过测试，没有问题。
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2楼2014-03-17 10:18:27
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