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jill900712金虫 (初入文坛)
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T4 PNK buffer 和T4 ligation buffer可以通用吗 已有1人参与
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| 请问，T4 ligation buffer 和T4 PNK buffer是通用的吗？前者成分中含有ATP，后者不含ATP。如果将两个oligos 进行phosphorylate and anneal步骤，protocol上是用T4 ligation buffer,NEB公司的人说他们的buffer是可以通用的，可是后者buffer里不含ATP 呀？可以直接用T4 PNK buffer吗？ |
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【答案】应助回帖
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T4 PNK 可以使用T4 DNA 连接酶的buffer T4 PNK本身也需要ATP(或其他三磷酸的如TTP等)，T4 PNK的buffer中不含有ATP，主要是因为T4 PNK常用作放射性标记，所以一般使用的时候会添加放射性的ATP等，buffer中就不加入ATP了，以免影响标记率。 T4 PNK的说明书中(NEB的)明确说明了，如果后续反应是连接反应的话，可以直接在T4 DNA连接酶的buffer中进行T4 PNK的反应。我们也做过测试，没有问题。 |
2楼2014-03-17 10:18:27
guifa zhai
铁虫 (初入文坛)
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3楼2022-01-05 12:39:52