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1楼2014-03-15 14:04:01

sageyaya

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【答案】应助回帖

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keaikexin: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-03-15 16:44:47

建议你下次拍的时候可以拍一个明场，这样可以对照出DAPI的那一片是单个细胞还是细胞碎片，至于绿色，我认为应该是你调的曝光时间过长，可以短一点，背景暗一点，这样细胞就会亮一些，不过我觉得既然是膜蛋白，感觉是没有染上。

2楼2014-03-15 14:50:50

keaikexin

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引用回帖:

2楼: Originally posted by sageyaya at 2014-03-15 14:50:50
建议你下次拍的时候可以拍一个明场，这样可以对照出DAPI的那一片是单个细胞还是细胞碎片，至于绿色，我认为应该是你调的曝光时间过长，可以短一点，背景暗一点，这样细胞就会亮一些，不过我觉得既然是膜蛋白，感觉是 ...

可是，荧光曝光时间短的话，就很模糊，画面不亮，基本就看不见荧光了……我这个可能放大倍数小，不是单克隆，所以，DAPI也是一团一团的

3楼2014-03-15 16:47:17

keaikexin

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这个是明场吗？

3.15a.jpg

4楼2014-03-15 17:09:14

keaikexin

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引用回帖:

膜蛋白染出来应该怎么样啊？

5楼2014-03-15 18:08:29

梅花飞飞

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keaikexin: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 谢谢~~~ 2014-03-19 19:03:25

你是刚接触细胞吧？
你的图有几个问题：
1、放大倍数太小；
2、如楼上所说，绿色背景是曝光时间的问题；
3、细胞区域选择不好，最好不要选择这种有很多聚集在一起的细胞，这些细胞已经凋亡或接近凋亡，你要选那些分散的，像你自己说的，要平铺贴壁的细胞；
4、就你给出的荧光图看，膜蛋白没有标记到，起码是标记量很小。
建议：如上，先把你买的抗体标记的protocol看好，一步一步来做；成像时，放大倍数，最好到100x，至少也有个60x的；然后你再调整曝光时间，看能不能得到更好一点的图。

牛人是啥？

6楼2014-03-18 03:58:31

c_jade

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有时候模糊也可能是焦距没对好啊tx

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7楼2014-03-18 15:03:44

jurkat.1640

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【答案】应助回帖

绿色荧光较弱，所以背景色就明显了。

8楼2014-03-19 10:18:02

20092210

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引用回帖:

8楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-03-19 10:18:02
绿色荧光较弱，所以背景色就明显了。

没有标记到或者表达低。

9楼2014-03-19 11:20:53

keaikexin

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 梅花飞飞 at 2014-03-18 03:58:31
你是刚接触细胞吧？
你的图有几个问题：
1、放大倍数太小；
2、如楼上所说，绿色背景是曝光时间的问题；
3、细胞区域选择不好，最好不要选择这种有很多聚集在一起的细胞，这些细胞已经凋亡或接近凋亡，你要选那 ...

恩恩，刚接触细胞，我再努力努力

10楼2014-03-19 19:04:31