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新手，第一次IF试验结果，求大神分析已有3人参与
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3.15b图为绿色荧光，小鼠ES细胞，膜蛋白，一抗比例为1:500，二抗比例为1:100，为什么背景这么绿，细胞荧光反而不够亮？3.15c为DAPI染色，细胞核为什么是一坨的，不应该是一个一个的吗？求大神指教~~~~解救解救后来人~~~~~ 3.15b.jpg  3.15c.jpg |
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梅花飞飞
木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 鼓励交流~~ 2014-03-18 08:46:58
keaikexin: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 谢谢~~~ 2014-03-19 19:03:25
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137167741: 金币+2, 鼓励交流~~ 2014-03-18 08:46:58
keaikexin: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 谢谢~~~ 2014-03-19 19:03:25
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你是刚接触细胞吧？ 你的图有几个问题： 1、放大倍数太小； 2、如楼上所说，绿色背景是曝光时间的问题； 3、细胞区域选择不好，最好不要选择这种有很多聚集在一起的细胞，这些细胞已经凋亡或接近凋亡，你要选那些分散的，像你自己说的，要平铺贴壁的细胞； 4、就你给出的荧光图看，膜蛋白没有标记到，起码是标记量很小。 建议：如上，先把你买的抗体标记的protocol看好，一步一步来做；成像时，放大倍数，最好到100x，至少也有个60x的；然后你再调整曝光时间，看能不能得到更好一点的图。 |
6楼2014-03-18 03:58:31