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keaikexin

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手,第一次IF试验结果,求大神分析 已有3人参与

3.15b图为绿色荧光,小鼠ES细胞,膜蛋白,一抗比例为1:500,二抗比例为1:100,为什么背景这么绿,细胞荧光反而不够亮?3.15c为DAPI染色,细胞核为什么是一坨的,不应该是一个一个的吗?求大神指教~~~~解救解救后来人~~~~~

新手,第一次IF试验结果,求大神分析
3.15b.jpg


新手,第一次IF试验结果,求大神分析-1
3.15c.jpg
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keaikexin

新虫 (初入文坛)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-18 08:46:45
引用回帖:
2楼: Originally posted by sageyaya at 2014-03-15 14:50:50
建议你下次拍的时候可以拍一个明场,这样可以对照出DAPI的那一片是单个细胞还是细胞碎片,至于绿色,我认为应该是你调的曝光时间过长,可以短一点,背景暗一点,这样细胞就会亮一些,不过我觉得既然是膜蛋白,感觉是 ...

可是,荧光曝光时间短的话,就很模糊,画面不亮,基本就看不见荧光了……我这个可能放大倍数小,不是单克隆,所以,DAPI也是一团一团的
3楼2014-03-15 16:47:17
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sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
keaikexin: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-03-15 16:44:47
建议你下次拍的时候可以拍一个明场,这样可以对照出DAPI的那一片是单个细胞还是细胞碎片,至于绿色,我认为应该是你调的曝光时间过长,可以短一点,背景暗一点,这样细胞就会亮一些,不过我觉得既然是膜蛋白,感觉是没有染上。
2楼2014-03-15 14:50:50
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keaikexin

新虫 (初入文坛)

这个是明场吗?
新手,第一次IF试验结果,求大神分析-2
3.15a.jpg

4楼2014-03-15 17:09:14
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keaikexin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sageyaya at 2014-03-15 14:50:50
建议你下次拍的时候可以拍一个明场,这样可以对照出DAPI的那一片是单个细胞还是细胞碎片,至于绿色,我认为应该是你调的曝光时间过长,可以短一点,背景暗一点,这样细胞就会亮一些,不过我觉得既然是膜蛋白,感觉是 ...

膜蛋白染出来应该怎么样啊?
5楼2014-03-15 18:08:29
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