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keaikexin

新虫 (初入文坛)

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[求助] 新手，第一次IF试验结果，求大神分析已有3人参与

3.15b图为绿色荧光，小鼠ES细胞，膜蛋白，一抗比例为1:500，二抗比例为1:100，为什么背景这么绿，细胞荧光反而不够亮？3.15c为DAPI染色，细胞核为什么是一坨的，不应该是一个一个的吗？求大神指教~~~~解救解救后来人~~~~~

3.15b.jpg

3.15c.jpg

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1楼2014-03-15 14:04:01

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keaikexin

新虫 (初入文坛)

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137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-03-18 08:46:45

引用回帖:

2楼: Originally posted by sageyaya at 2014-03-15 14:50:50
建议你下次拍的时候可以拍一个明场，这样可以对照出DAPI的那一片是单个细胞还是细胞碎片，至于绿色，我认为应该是你调的曝光时间过长，可以短一点，背景暗一点，这样细胞就会亮一些，不过我觉得既然是膜蛋白，感觉是 ...

可是，荧光曝光时间短的话，就很模糊，画面不亮，基本就看不见荧光了……我这个可能放大倍数小，不是单克隆，所以，DAPI也是一团一团的