| 查看: 3013 | 回复: 7 | ||
[求助]
粗酶液以ABTS为底物测定漆酶活性，死活感觉测不到酶活力。求指点！！！ 已有3人参与
|
正在培育一株产漆酶的菌，可以降解部分有机物，粗酶液上清液用ABTS水溶液为底物1mM浓度检测，ABTS水溶液呈现淡蓝色。从美国Sigma公司买的。但是反应十分钟OD与空白比较只是增加了0.1。粗酶液蛋白总含量是19mg/ml.缓冲液PH4.5 菌体破碎上清液、沉淀、培养基都测了。只有上清在OD420处还稍微有点变化，十分钟OD增加只是0.1.怎么测都不行。求指点。谢谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
2026国自然函评费到账
已经有18人回复
-
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有15人回复
-
范进中举一文的中心思想
已经有7人回复
-
朋友圈看到的
已经有9人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有13人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有16人回复
-
放榜前的不淡定
已经有17人回复
-
科研孤儿太难了
已经有19人回复
-
明天应该可查了！？
已经有4人回复
-
什么时候开奖？
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- ABTS法测漆酶活性
已经有5人回复
- 漆酶酶活定义方法
已经有10人回复
- 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
已经有58人回复
- 光吸收值是产物的还是底物的
已经有13人回复
reallpf
木虫 (正式写手)
- MicEPI: 21
- 应助: 150 (高中生)
- 金币: 3388.3
- 散金: 2
- 红花: 12
- 帖子: 342
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 1892494
- 注册: 2012-07-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+3, 鼓励热心应助 2014-03-06 18:48:11
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+3, 鼓励热心应助 2014-03-06 18:48:11
|
你的粗酶液是发酵上清还是细胞破碎后的上清？ 测定酶活力前，应该跑个SDS-PAGE看看，别你的蛋白都没有或者浓度特别低还在那反复测。你测定的是总蛋白含量，说明不了什么问题。 漆酶都已经是几年前的热点了，测定酶活的方式还是比较成熟的。将底物掺到琼脂平板中，滴加粗酶液，看是否能形成透明圈（需要染色）。 另外你的粗酶液是发酵罐还是摇瓶得到的？摇瓶酶活应该很低吧，很难测得到。而且你粗酶液没有除盐，也没有浓缩。可以考虑超薄切向流除盐，然后透析膜浓缩，再测酶活。 |
2楼2014-03-06 15:04:14
3楼2014-03-06 17:26:58
4楼2015-05-26 22:38:44
louchunxia
木虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1701.6
- 帖子: 35
- 在线: 27.5小时
- 虫号: 3092516
- 注册: 2014-03-27
- 性别: MM
- 专业: 环境工程
5楼2015-09-10 17:22:12
sea4on
新虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 211.5
- 散金: 5
- 帖子: 69
- 在线: 28.2小时
- 虫号: 3431851
- 注册: 2014-09-21
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
6楼2017-06-04 16:36:01
7楼2018-01-31 16:14:16
|
请问abts加到Tris-ac的缓冲溶液（硝酸银 硝酸钾 ph 7.4）中出现沉淀是为什么呀 中间会反应吗 可是单独配成溶液加abts进去又没问题 之前打算直接用这个缓冲溶液溶解发现也不行 求指点 发自小木虫Android客户端 |
8楼2019-08-04 14:13:09
20