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粗酶液以ABTS为底物测定漆酶活性，死活感觉测不到酶活力。求指点！！！ 已有3人参与
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正在培育一株产漆酶的菌，可以降解部分有机物，粗酶液上清液用ABTS水溶液为底物1mM浓度检测，ABTS水溶液呈现淡蓝色。从美国Sigma公司买的。但是反应十分钟OD与空白比较只是增加了0.1。粗酶液蛋白总含量是19mg/ml.缓冲液PH4.5 菌体破碎上清液、沉淀、培养基都测了。只有上清在OD420处还稍微有点变化，十分钟OD增加只是0.1.怎么测都不行。求指点。谢谢！！！ |
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7楼2018-01-31 16:14:16
reallpf
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【答案】应助回帖
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你的粗酶液是发酵上清还是细胞破碎后的上清？ 测定酶活力前，应该跑个SDS-PAGE看看，别你的蛋白都没有或者浓度特别低还在那反复测。你测定的是总蛋白含量，说明不了什么问题。 漆酶都已经是几年前的热点了，测定酶活的方式还是比较成熟的。将底物掺到琼脂平板中，滴加粗酶液，看是否能形成透明圈（需要染色）。 另外你的粗酶液是发酵罐还是摇瓶得到的？摇瓶酶活应该很低吧，很难测得到。而且你粗酶液没有除盐，也没有浓缩。可以考虑超薄切向流除盐，然后透析膜浓缩，再测酶活。 |
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