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丁步鹏

捐助贵宾 (著名写手)

[求助] 关于抑菌实验的几个问题 已有2人参与

如题,本人是高分子材料出生,临时要检测一下聚合物的抑菌性,第一次接触生物实验,有很多地方还想请教各位。
我想做一下抑菌圈和MIC的实验,样品不溶于水,可溶于DMSO,DMF,和THF。
问题一:实验时发现,当含有大肠杆菌,营养肉汤,和琼脂的培养基在30-40℃凝固后,自己铺膜得到的样品片在上面粘不牢,倒置培养皿时,样品片都掉下来了,无法进行实验。怎么破?如果配成溶液滴到滤纸片或载玻片上,待溶剂挥发了再粘在上面可以么?或者直接待琼脂凝固前就将样品片放进去,一起凝固,可以么?
问题二:上述三种溶剂对MIC的实验结果会不会有影响?如果这三种溶剂本身就有杀菌效果,我的样品还能进行MIC实验么?
问题三:如果抑菌圈和MIC实验都不能顺利进行,还有其他方法测试样品的杀菌性么?
在此先谢谢各位,小弟比较急哈……
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
丁步鹏: 金币+8, 有帮助 2014-02-28 16:45:38
丁步鹏: 金币+8, 有帮助 2014-02-28 17:33:11
zhang8826857: 金币+1, 奖励 2014-02-28 19:17:03
MIC试验没有做过,如果想看一下上述三种溶剂本身是否对指示菌有无抑制作用可以先做个预实验观察一下。再有大肠杆菌本身在有氧条件下也可以生长,因此没有必要必须用混板法培养,涂布就可以。因此应该没有必要倒置培养吧。如果混板样品一起放进去的话恐怕会影响观察效果,溶剂挥发后粘上有必要的话你试一下吧。
我们都是小吉米
2楼2014-02-28 16:00:09
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丁步鹏

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by little_Jimmy at 2014-02-28 16:00:09
MIC试验没有做过,如果想看一下上述三种溶剂本身是否对指示菌有无抑制作用可以先做个预实验观察一下。再有大肠杆菌本身在有氧条件下也可以生长,因此没有必要必须用混板法培养,涂布就可以。因此应该没有必要倒置培 ...

刚刚查了资料,之所以倒置是因为担心培养皿的盖子上的水蒸气会凝结成小水滴,落下来对结果产生误差。还有涂布是指将混有细菌的培养基涂在样品片上?
3楼2014-02-28 16:45:46
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 丁步鹏 at 2014-02-28 16:45:46
刚刚查了资料,之所以倒置是因为担心培养皿的盖子上的水蒸气会凝结成小水滴,落下来对结果产生误差。还有涂布是指将混有细菌的培养基涂在样品片上?...

嗯 涂布就是用玻璃刮铲均匀将菌液涂在培养基上,如果担心培养基上水蒸汽凝结滴落的话也可以将倒好的平板在无菌的环境中放置过夜。这样有两个好处,一是凝结的干燥水蒸汽,使得不会滴在培养基上。二是可以观察培养基中是否染菌。
我们都是小吉米
4楼2014-02-28 16:54:46
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丁步鹏

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by little_Jimmy at 2014-02-28 16:54:46
嗯 涂布就是用玻璃刮铲均匀将菌液涂在培养基上,如果担心培养基上水蒸汽凝结滴落的话也可以将倒好的平板在无菌的环境中放置过夜。这样有两个好处,一是凝结的干燥水蒸汽,使得不会滴在培养基上。二是可以观察培养基 ...

这个是不是对操作环境要求有点高啊,无菌的环境,我们实验室很难实现,除非直接去生命学院做,是不是有点小题大作了,还是我想多了。另外涂布这种方法均匀性有之前那个好吗,我就想越简单越好,如果实在不行,就老老实实按国标做了。
5楼2014-02-28 17:32:49
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 丁步鹏 at 2014-02-28 17:32:49
这个是不是对操作环境要求有点高啊,无菌的环境,我们实验室很难实现,除非直接去生命学院做,是不是有点小题大作了,还是我想多了。另外涂布这种方法均匀性有之前那个好吗,我就想越简单越好,如果实在不行,就老 ...

如果对于活菌计数来说涂布和混板两种方法都不是很精确,但就均匀性来讲个人认为涂布的效果好要一些。其实隔夜操作注意的就是尽可能不感染环境中的杂菌,我们做的时候就是把凝好的平板用灭过菌的报纸盖住放在无菌操作台上,效果还可以的。抑菌试验倒置培养我真的没有做过。
我们都是小吉米
6楼2014-03-01 09:51:29
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林晓1361

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
丁步鹏: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-21 09:34:41
我已经做了预实验,DMSO有抑菌效果;查看的文献说DMF溶液的阴性对照没有抑菌作用,今天再试试
7楼2015-05-20 16:42:01
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丁步鹏

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 林晓1361 at 2015-05-20 16:42:01
我已经做了预实验,DMSO有抑菌效果;查看的文献说DMF溶液的阴性对照没有抑菌作用,今天再试试

你确定? 你也是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌?
8楼2015-05-21 09:34:28
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zhenzhenkou

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 林晓1361 at 2015-05-20 16:42:01
我已经做了预实验,DMSO有抑菌效果;查看的文献说DMF溶液的阴性对照没有抑菌作用,今天再试试

请教楼主,最后是怎么解决的?我现在也遇到这样额问题了。
9楼2015-09-14 09:25:58
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