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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 拖尾因子达不到要求
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516tt

新虫 (初入文坛)

[求助] 拖尾因子达不到要求 已有3人参与

我在建立测定核酸的色谱条件，结果拖尾因子只有0.5左右，我尝试了加三乙胺，调节流动相比例，最终还换了柱子，结果如下：
我要继续哪方面的调试呢？
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    • 2014-02-24 14:23:24, 29.5 K

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1楼 2014-02-24 14:23:53
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wuhaibobo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怎么像有杂质没分开啊？
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人生漫漫
2楼2014-02-24 15:33:15
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做过部分蛋白，标准品都不是很纯，因为它们的异构体或者碎片较多，看图是不是核酸的异构，不是很懂，个人想法
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3楼2014-02-24 21:22:11
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Pharma_soup

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
516tt: 金币+20, ★有帮助, 谢谢 2014-03-03 10:17:01
个人建议考虑以下三方面：
1.加入磷酸盐且调节PH值，加三乙胺和酸都应该都不好使的，磷酸盐体系能够加强保留，加的量保证磷酸盐在10~30mM；
2. 调节PH在2.5~7.6之间，因为核酸有等电点，等电点下一定可以得到比较单一的峰；
3.洗脱时如果有机相是甲醇，可以换成乙腈，
4.样品应该考虑用酸溶解以增加溶解性；
5.开始摸方法的时候尽量使供试品的浓度比较低，这样容易发现什么色谱条件最敏感，另外考虑一下样品的稳定性，试验过程中看峰纯度可以知道样品的纯度如何，峰的纯度如何。
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4楼2014-02-25 13:24:06
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516tt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhaibobo at 2014-02-24 15:33:15
怎么像有杂质没分开啊？

看着图谱是觉得杂质没分开，可是公司提供的是标品，纯度有90%以上呢
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5楼2014-03-03 10:18:18
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516tt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-02-24 21:22:11
做过部分蛋白，标准品都不是很纯，因为它们的异构体或者碎片较多，看图是不是核酸的异构，不是很懂，个人想法

标准品不纯也应该是其中一个原因吧，我总担心方法还不是很好，没办法做标准曲线
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6楼2014-03-03 10:19:34
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wyy080214

实习版主 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 516tt at 2014-03-03 10:19:34
标准品不纯也应该是其中一个原因吧，我总担心方法还不是很好，没办法做标准曲线...

方法觉得不好，那就通过改变流动相和色谱柱来改善
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7楼2014-03-03 10:58:04
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