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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » GAPDH的表达量会改变吗
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963979587

银虫 (初入文坛)

[求助] GAPDH的表达量会改变吗已有4人参与

各位虫友，我最近做的RT-PCR,细胞是用IL-1β刺激过的，为什么表达量和没被刺激的细胞的表达量差别很大？
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1楼2014-02-24 09:31:22
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-02-24 12:11:16
GAPDH作为管家基因表达量相对稳定，差距不会大。表达量差别大你看看样品有没有问题。
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hehe
2楼2014-02-24 12:10:48
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963979587

银虫 (初入文坛)
我重复了好多次，结果都一样，rt－pcr好像和rna质量没有很大的关系，总是觉得加了IL之后，GAPDH的量就会突然增多

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-02-25 13:10:12
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963979587

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-24 12:10:48
GAPDH作为管家基因表达量相对稳定，差距不会大。表达量差别大你看看样品有没有问题。

我重复了好多次，结果都一样，rt－pcr好像和rna质量没有很大的关系，总是觉得加了IL之后，GAPDH的量就会突然增多

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-02-25 13:10:49
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用actin试试，毕竟GAPDH是种酶
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5楼2014-02-25 15:43:46
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 16:48:35
实在不行就进行严格的细胞计数，统一细胞数；
或者测总RNA浓度或总cDNA浓度，用水使浓度调到一样，不用测内参基因。
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6楼2014-02-25 15:47:54
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DAX1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
963979587(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 16:48:44
只要是基因，表达量就会有可能有变化，楼主可以考虑多用几个内参，比如楼上的actin，tbp，18srna等等。
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7楼2014-02-25 16:17:47
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963979587

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 15:47:54
实在不行就进行严格的细胞计数，统一细胞数；
或者测总RNA浓度或总cDNA浓度，用水使浓度调到一样，不用测内参基因。

这个操作起来着实麻烦啊，好像cDNA不容易确定浓度，它的体系不是单纯的水，先试试换个内参，O(∩_∩)O

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2014-02-25 23:27:37
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-04 12:20:38
这篇文章有较为详细的描述。
GAPDH实际上不是很好的内参。
http://download.bioon.com.cn/upl ... 1XwFTkO2.attach.pdf
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寝室楼的大爷、大妈都是哲学家，他们每天都在思考人类最根本的三个问题：你是谁？你从哪儿来？要去哪儿？
9楼2015-02-04 11:19:03
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