应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 交流毒素在细胞膜受体的钓选
101/1返回列表
查看: 977  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

seasonin

银虫 (小有名气)

[交流] 交流毒素在细胞膜受体的钓选

实验思路：现制备有杀虫蛋白A，想探究其对昆虫中肠细胞的毒杀机制，依据苏云金芽胞杆菌的抗虫作用，猜想杀虫蛋白A借助昆虫中肠细胞膜的特异受体，通过信号传导或转入细胞后修饰等进入细胞，发挥毒力。借助蛋白-蛋白之间的相互作用寻找目的蛋白的受体，亦或其它方法证明蛋白之间的相互作用并找到对应的受体分子。
瓶颈有：1.大量收集细胞后，提取细胞膜需要保证细胞膜的蛋白完整。
              2.采用免疫共沉淀钓取受体，输入输出要如何设置才能保证实验数据可靠。
目前我已经做过IP和pulldown，效果都不好。  
如果大家有更好的思路或者具体的文献方法指导，感激不尽

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2014-02-09 15:42:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

userhung

禁虫 (文学泰斗)
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-09 15:56:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2014-02-09 15:56:55
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~

thanks
回复此楼
3楼2014-02-09 16:35:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:15
用NP40+cocktail处理细胞后，冰上裂解，离心后取上清（膜蛋白、胞浆蛋白等），与His-beads做pre-clear，接着取上清，与蛋白A孵育，然后将（蛋白A+上清）与His-beads孵育，之后上样buffer处理后SDS-PAGE检测
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-10 09:47:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
SDS-PAGE显示，与对照相比，实验组并未多出任何条带，不知道是蛋白之间作用力太弱没拉下目的带还是其它原因
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-10 09:49:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:35
目前我有几个疑问
1.提蛋白膜的方法是否合适？
2.如何确定细胞膜上就存在目的蛋白的受体？确定之后如何鉴定到具体的蛋白？
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-10 09:52:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdfang83

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:26
我准备做的实验和你的原理类似，可以交流一下不？
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-14 16:35:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zdfang83 at 2014-02-14 16:35:43
我准备做的实验和你的原理类似，可以交流一下不？

你有什么想法呢？我只是觉得这么从膜上找受体要冒很大风险，炮灰率极大，又没有摸透要怎么往下做
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-15 15:06:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
帖子没有人回答，我查过一些寻找受体的文章，在炭疽杆菌的毒素受体寻找时，毒素与细胞膜上受体结合的细胞株死亡。作者突变了细胞株CHO，90%细胞死亡，将毒素施与突变细胞株，存活细胞株为实验组，死亡细胞株为对照
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-17 08:55:46
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
10楼2014-03-03 10:59:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 seasonin 的主题更新
101/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂材料学硕 +3 词凝Y 2026-03-02 3/150 2026-03-02 21:51 by 杨杨杨紫
[考研] 276求调剂 +5 路lyh123 2026-02-28 6/300 2026-03-02 20:35 by hypershenger
[考研] 材料085601调剂 +5 多多子. 2026-03-02 5/250 2026-03-02 19:15 by zhukairuo
[考研] 289求调剂 +8 yang婷 2026-03-02 9/450 2026-03-02 19:08 by zhukairuo
[考研] 268求调剂 +3 好运连绵不绝 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:05 by zhukairuo
[考研] 299求调剂 +4 kkcoco25 2026-03-02 4/200 2026-03-02 18:04 by barlinike
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +6 pin8023 2026-02-28 8/400 2026-03-02 17:13 by 0854蹲调剂
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分，求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +4 Qwertyuop 2026-03-01 4/200 2026-03-02 14:27 by 升格阿达
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +6 弗格个 2026-02-28 9/450 2026-03-02 14:09 by liyongv
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 7/350 2026-03-02 10:38 by lature00
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭