应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 交流毒素在细胞膜受体的钓选
51/1返回列表
查看: 917  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

seasonin

银虫 (小有名气)

[交流] 交流毒素在细胞膜受体的钓选

实验思路：现制备有杀虫蛋白A，想探究其对昆虫中肠细胞的毒杀机制，依据苏云金芽胞杆菌的抗虫作用，猜想杀虫蛋白A借助昆虫中肠细胞膜的特异受体，通过信号传导或转入细胞后修饰等进入细胞，发挥毒力。借助蛋白-蛋白之间的相互作用寻找目的蛋白的受体，亦或其它方法证明蛋白之间的相互作用并找到对应的受体分子。
瓶颈有：1.大量收集细胞后，提取细胞膜需要保证细胞膜的蛋白完整。
              2.采用免疫共沉淀钓取受体，输入输出要如何设置才能保证实验数据可靠。
目前我已经做过IP和pulldown，效果都不好。  
如果大家有更好的思路或者具体的文献方法指导，感激不尽

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2014-02-09 15:42:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zdfang83 at 2014-02-14 16:35:43
我准备做的实验和你的原理类似，可以交流一下不？

你有什么想法呢？我只是觉得这么从膜上找受体要冒很大风险，炮灰率极大，又没有摸透要怎么往下做
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-15 15:06:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

userhung

禁虫 (文学泰斗)
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-09 15:56:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2014-02-09 15:56:55
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~

thanks
回复此楼
3楼2014-02-09 16:35:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:15
用NP40+cocktail处理细胞后，冰上裂解，离心后取上清（膜蛋白、胞浆蛋白等），与His-beads做pre-clear，接着取上清，与蛋白A孵育，然后将（蛋白A+上清）与His-beads孵育，之后上样buffer处理后SDS-PAGE检测
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-10 09:47:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭