应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 交流毒素在细胞膜受体的钓选
101/1返回列表
查看: 1176  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

seasonin

银虫 (小有名气)

[交流] 交流毒素在细胞膜受体的钓选

实验思路：现制备有杀虫蛋白A，想探究其对昆虫中肠细胞的毒杀机制，依据苏云金芽胞杆菌的抗虫作用，猜想杀虫蛋白A借助昆虫中肠细胞膜的特异受体，通过信号传导或转入细胞后修饰等进入细胞，发挥毒力。借助蛋白-蛋白之间的相互作用寻找目的蛋白的受体，亦或其它方法证明蛋白之间的相互作用并找到对应的受体分子。
瓶颈有：1.大量收集细胞后，提取细胞膜需要保证细胞膜的蛋白完整。
              2.采用免疫共沉淀钓取受体，输入输出要如何设置才能保证实验数据可靠。
目前我已经做过IP和pulldown，效果都不好。  
如果大家有更好的思路或者具体的文献方法指导，感激不尽

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2014-02-09 15:42:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

userhung

禁虫 (文学泰斗)
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-09 15:56:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2014-02-09 15:56:55
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~

thanks
回复此楼
3楼2014-02-09 16:35:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:15
用NP40+cocktail处理细胞后，冰上裂解，离心后取上清（膜蛋白、胞浆蛋白等），与His-beads做pre-clear，接着取上清，与蛋白A孵育，然后将（蛋白A+上清）与His-beads孵育，之后上样buffer处理后SDS-PAGE检测
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-10 09:47:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
SDS-PAGE显示，与对照相比，实验组并未多出任何条带，不知道是蛋白之间作用力太弱没拉下目的带还是其它原因
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-10 09:49:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:35
目前我有几个疑问
1.提蛋白膜的方法是否合适？
2.如何确定细胞膜上就存在目的蛋白的受体？确定之后如何鉴定到具体的蛋白？
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-10 09:52:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdfang83

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:26
我准备做的实验和你的原理类似，可以交流一下不？
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-14 16:35:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zdfang83 at 2014-02-14 16:35:43
我准备做的实验和你的原理类似，可以交流一下不？

你有什么想法呢？我只是觉得这么从膜上找受体要冒很大风险，炮灰率极大，又没有摸透要怎么往下做
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-15 15:06:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
帖子没有人回答，我查过一些寻找受体的文章，在炭疽杆菌的毒素受体寻找时，毒素与细胞膜上受体结合的细胞株死亡。作者突变了细胞株CHO，90%细胞死亡，将毒素施与突变细胞株，存活细胞株为实验组，死亡细胞株为对照
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-17 08:55:46
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
10楼2014-03-03 10:59:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 seasonin 的主题更新
101/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭