24小时热门版块排行榜    

查看: 1326  |  回复: 9

seasonin

银虫 (小有名气)


[交流] 交流毒素在细胞膜受体的钓选

实验思路:现制备有杀虫蛋白A,想探究其对昆虫中肠细胞的毒杀机制,依据苏云金芽胞杆菌的抗虫作用,猜想杀虫蛋白A借助昆虫中肠细胞膜的特异受体,通过信号传导或转入细胞后修饰等进入细胞,发挥毒力。借助蛋白-蛋白之间的相互作用寻找目的蛋白的受体,亦或其它方法证明蛋白之间的相互作用并找到对应的受体分子。
瓶颈有:1.大量收集细胞后,提取细胞膜需要保证细胞膜的蛋白完整。
              2.采用免疫共沉淀钓取受体,输入输出要如何设置才能保证实验数据可靠。
目前我已经做过IP和pulldown,效果都不好。  
如果大家有更好的思路或者具体的文献方法指导,感激不尽

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:15 ]
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

userhung

禁虫 (文学泰斗)


帮顶,blessing, blessing, blessing ! ~~~
2楼2014-02-09 15:56:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2014-02-09 15:56:55
帮顶,blessing, blessing, blessing ! ~~~

thanks
3楼2014-02-09 16:35:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:15
用NP40+cocktail处理细胞后,冰上裂解,离心后取上清(膜蛋白、胞浆蛋白等),与His-beads做pre-clear,接着取上清,与蛋白A孵育,然后将(蛋白A+上清)与His-beads孵育,之后上样buffer处理后SDS-PAGE检测
4楼2014-02-10 09:47:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


SDS-PAGE显示,与对照相比,实验组并未多出任何条带,不知道是蛋白之间作用力太弱没拉下目的带还是其它原因
5楼2014-02-10 09:49:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:35
目前我有几个疑问
1.提蛋白膜的方法是否合适?
2.如何确定细胞膜上就存在目的蛋白的受体?确定之后如何鉴定到具体的蛋白?
6楼2014-02-10 09:52:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdfang83

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:26
我准备做的实验和你的原理类似,可以交流一下不?
7楼2014-02-14 16:35:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by zdfang83 at 2014-02-14 16:35:43
我准备做的实验和你的原理类似,可以交流一下不?

你有什么想法呢?我只是觉得这么从膜上找受体要冒很大风险,炮灰率极大,又没有摸透要怎么往下做
8楼2014-02-15 15:06:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


帖子没有人回答,我查过一些寻找受体的文章,在炭疽杆菌的毒素受体寻找时,毒素与细胞膜上受体结合的细胞株死亡。作者突变了细胞株CHO,90%细胞死亡,将毒素施与突变细胞株,存活细胞株为实验组,死亡细胞株为对照
9楼2014-02-17 08:55:46
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)


内容已删除
10楼2014-03-03 10:59:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 seasonin 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-10-31 6/300 2026-11-02 12:44 by n0P4fnsXKbBK
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-10-31 8/400 2026-11-02 12:31 by n0P4fnsXKbBK
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-02 12:20 by n0P4fnsXKbBK
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-11-01 6/300 2026-11-02 10:02 by dcc2yOIRGGTT
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 09:29 by dcc2yOIRGGTT
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +3 iaeyuan 2026-11-01 3/150 2026-11-02 07:49 by kudofaye
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 06:29 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 5/250 2026-11-02 06:07 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 05:47 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 21/1050 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 18/900 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:26 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:24 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-11-01 22:01 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 21:45 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 8/400 2026-11-01 21:35 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 19:50 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
信息提示
请填处理意见