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seasonin

银虫 (小有名气)


[交流] 交流毒素在细胞膜受体的钓选

实验思路:现制备有杀虫蛋白A,想探究其对昆虫中肠细胞的毒杀机制,依据苏云金芽胞杆菌的抗虫作用,猜想杀虫蛋白A借助昆虫中肠细胞膜的特异受体,通过信号传导或转入细胞后修饰等进入细胞,发挥毒力。借助蛋白-蛋白之间的相互作用寻找目的蛋白的受体,亦或其它方法证明蛋白之间的相互作用并找到对应的受体分子。
瓶颈有:1.大量收集细胞后,提取细胞膜需要保证细胞膜的蛋白完整。
              2.采用免疫共沉淀钓取受体,输入输出要如何设置才能保证实验数据可靠。
目前我已经做过IP和pulldown,效果都不好。  
如果大家有更好的思路或者具体的文献方法指导,感激不尽

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:15 ]
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seasonin

银虫 (小有名气)



137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:35
目前我有几个疑问
1.提蛋白膜的方法是否合适?
2.如何确定细胞膜上就存在目的蛋白的受体?确定之后如何鉴定到具体的蛋白?
6楼2014-02-10 09:52:02
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userhung

禁虫 (文学泰斗)


帮顶,blessing, blessing, blessing ! ~~~
2楼2014-02-09 15:56:55
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seasonin

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2014-02-09 15:56:55
帮顶,blessing, blessing, blessing ! ~~~

thanks
3楼2014-02-09 16:35:10
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seasonin

银虫 (小有名气)



137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 21:35:15
用NP40+cocktail处理细胞后,冰上裂解,离心后取上清(膜蛋白、胞浆蛋白等),与His-beads做pre-clear,接着取上清,与蛋白A孵育,然后将(蛋白A+上清)与His-beads孵育,之后上样buffer处理后SDS-PAGE检测
4楼2014-02-10 09:47:15
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