| 查看: 2940 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
wangdunzju新虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白SDSPAGE电泳遇到分子量漂移，变大30多kDa! 已有1人参与
|
|
|
最近在做蛋白的SDS-PAGE电泳，遇到目的蛋白分子量漂移的现象，请各位大侠给鉴定一下原因： 我的目的蛋白等电点为7.2，基因序列已知，可以预测其分子量为42kDa左右。用TCA-丙酮沉淀法提取总蛋白做WB检验后，证明蛋白分子量与预测的一致。 因为后面要做一些与功能相关的实验，想用可溶的体系提取蛋白。 我于是用不同pH值的提取液（Tris体系），分为5,7,9三个PH梯度分别提取烟草叶片蛋白，四度离心15分钟（13000rpm），然后将每个样品的上清（可溶性组分）与沉淀组分（不溶性组分）分别制样，用于WB检测，结果如下：  如图，TCA法杂出42kDa的目的条带，与预测分子量一致；而上清组分中没有杂出目的条带；沉淀组分中在高pH提取液样品中杂出一个约70kDa的目的带！这让我很纠结，怎么分子量会变大呢？蛋白二聚体应该不可能，因为是SDS-page电泳，SDS会打断亚基之间的结构，况且制样时用上样缓冲液煮过10分钟。那么是什么原因使蛋白的表观分子量变大了呢？我怀疑是是不是蛋白与核酸结合导致蛋白跑慢了，但不知道SDS-page电泳会不会导致核酸与蛋白的结合被破坏，所以不敢下这个结论。或者还有什么别的什么因素导致这样的结果？有这方面经验的虫友帮忙诊断一下啊！多谢了！ 祝虫友马年有一切！ [ Last edited by wangdunzju on 2014-2-9 at 15:21 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
288求调剂，一志愿华南理工大学071005
已经有5人回复
-
一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂
已经有5人回复
-
294求调剂材料与化工专硕
已经有12人回复
-
0856调剂，是学校就去
已经有5人回复
-
0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章
已经有13人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有11人回复
-
复试调剂
已经有6人回复
-
0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历
已经有11人回复
-
321求调剂
已经有10人回复
-
东华理工大学化材专业26届硕士博士申请
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- westernblot 目标蛋白无条带
已经有9人回复
- western 中，目的蛋白没有，但是Marker 暴出来了，什么原因啊
已经有16人回复
- 【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？
已经有13人回复
8楼2014-02-12 11:07:14
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
2楼2014-02-10 10:03:38
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:19:10
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:19:10
|
SDS上样缓冲液是否加了巯基乙醇或者DTT？核酸蛋白复合物在SDS作用下一般会被打断。如果你不能确定，可以用核酸酶消化样品后与未做消化的比较。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wangdunzju3楼2014-02-10 13:56:40
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17153.2
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14521
- 在线: 2184小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
4楼2014-02-11 10:52:04
