应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Gibson assembly 的一点疑问
51/1返回列表
查看: 3912  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)

[交流] Gibson assembly 的一点疑问 已有3人参与

哪位做过Gibson assembly的，请来解答我的一点疑问，gibson assembly是链接两条线型片段的，那么质粒怎么做成线型，而且在需要的地方断开？gibson说是不用任何内切酶，不需要任何酶切位点，那么怎么做到在需要的位置断开的？看protocol上只是说， generate the segments by PCR，可是怎么得到？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-28 07:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by xixi_pds7 at 2014-01-31 08:36:30
就是不用酶切点了？可以这样理解么，就是说，PCR的时候会产生很多片段，只有含有overlap同源臂的那一段才可以扩增？...

可以不用酶切位点，不用可能更好扩增。如果质粒都扩增出来很多带，可以通过优化或者胶回收来解决。扩增出来的片段两端是重组的overlap区。一般质粒可以用同一对引物，需要考虑overlap的是插入片段的引物。从你的帖子的消息看，个人建议你先做虚拟克隆，弄清楚了，再来设计引物进行PCR和Gibson Assembly。
赞一下 回复此楼
为什么
4楼2014-01-31 09:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

547star

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-31 12:56:28
根据质粒序列设计两条引物进行PCR扩增得到线型双链DNA。
赞一下 回复此楼
为什么
2楼2014-01-31 00:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2014-01-31 00:57:30
根据质粒序列设计两条引物进行PCR扩增得到线型双链DNA。

就是不用酶切点了？可以这样理解么，就是说，PCR的时候会产生很多片段，只有含有overlap同源臂的那一段才可以扩增？
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-31 08:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2014-01-31 09:41:42
可以不用酶切位点，不用可能更好扩增。如果质粒都扩增出来很多带，可以通过优化或者胶回收来解决。扩增出来的片段两端是重组的overlap区。一般质粒可以用同一对引物，需要考虑overlap的是插入片段的引物。从你的帖 ...

我的问题是前段，因为Gibson Assembly 是两条线性链的链接，我只是有点疑惑，怎么保证自己的质粒在需要的地方断开呢
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-31 10:03:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭