应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Gibson assembly 的一点疑问
51/1返回列表
查看: 3665  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)

[交流] Gibson assembly 的一点疑问 已有3人参与

哪位做过Gibson assembly的，请来解答我的一点疑问，gibson assembly是链接两条线型片段的，那么质粒怎么做成线型，而且在需要的地方断开？gibson说是不用任何内切酶，不需要任何酶切位点，那么怎么做到在需要的位置断开的？看protocol上只是说， generate the segments by PCR，可是怎么得到？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-28 07:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2014-01-31 00:57:30
根据质粒序列设计两条引物进行PCR扩增得到线型双链DNA。

就是不用酶切点了？可以这样理解么，就是说，PCR的时候会产生很多片段，只有含有overlap同源臂的那一段才可以扩增？
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-31 08:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

547star

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-31 12:56:28
根据质粒序列设计两条引物进行PCR扩增得到线型双链DNA。
赞一下 回复此楼
为什么
2楼2014-01-31 00:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by xixi_pds7 at 2014-01-31 08:36:30
就是不用酶切点了？可以这样理解么，就是说，PCR的时候会产生很多片段，只有含有overlap同源臂的那一段才可以扩增？...

可以不用酶切位点，不用可能更好扩增。如果质粒都扩增出来很多带，可以通过优化或者胶回收来解决。扩增出来的片段两端是重组的overlap区。一般质粒可以用同一对引物，需要考虑overlap的是插入片段的引物。从你的帖子的消息看，个人建议你先做虚拟克隆，弄清楚了，再来设计引物进行PCR和Gibson Assembly。
赞一下 回复此楼
为什么
4楼2014-01-31 09:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2014-01-31 09:41:42
可以不用酶切位点，不用可能更好扩增。如果质粒都扩增出来很多带，可以通过优化或者胶回收来解决。扩增出来的片段两端是重组的overlap区。一般质粒可以用同一对引物，需要考虑overlap的是插入片段的引物。从你的帖 ...

我的问题是前段，因为Gibson Assembly 是两条线性链的链接，我只是有点疑惑，怎么保证自己的质粒在需要的地方断开呢
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-31 10:03:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +4 石能伟 2026-03-17 4/200 2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 材料与化工考研调剂 +4 孅華 2026-03-22 4/200 2026-03-23 16:13 by 一休哥FU
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭